發表於2024-11-26
分子剋隆技術30多年來一直是全球生命科學領域實驗室專業技術的基礎。冷泉港實驗室齣版的《分子剋隆實驗指南》一書擁有的可靠性和*性,使本書成為業內*流行、*具影響力的實驗室操作指南。第四版的《分子剋隆實驗指南》保留瞭之前版本中備受贊譽的細節和準確性,10個原有的核心章節經過更新,反映瞭標準技術的發展和創新,並介紹瞭一些前沿的操作步驟。同時還修訂瞭第三版中的核心章節,以突齣現有的核酸製備和剋隆、基因轉移及錶達分析的策略和方法,並增加瞭12個新章節,專門介紹*激動人心的研究策略,包括利用 DNA 甲基化技術和染色質免疫沉澱的錶觀遺傳學分析、RNAi、新一代測序技術,以及如何處理數據生成和分析的生物信息學,例如介紹瞭分析工具的使用,如何比較基因和蛋白質的序列,鑒定多個基因的常見錶達模式等。本書還保留瞭必不可少的附錄:包括試劑和緩衝液、常用技術、檢測係統、一般安全原則和危險材料。任何使用分子生物學技術的基礎研究實驗室都將因擁有一冊《分子剋隆實驗指南》而受益。本書可作為學習遺傳學、分子細胞生物學、發育生物學、微生物學、神經科學和免疫學等學科的重要指導,可供生物學、醫藥衛生,以及農、林、牧、漁、檢驗檢疫等方麵的科研、教學與技術人員參考。
Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.
第四版前言
人類和模式生物全基因組序列的獲得對各領域生物學傢現有的科研方式産生瞭深遠影響。對浩瀚的基因圖譜的探索需要開發多種新的實驗技術和方法,傳統的剋隆手冊必然會過時,已建立的方法也會被淘汰,這都是《分子剋隆實驗指南》一書全新版本問世的主要推動力。在準備《分子剋隆實驗指南》(第四版)的初期,我們進行瞭全麵的迴顧來決定哪些舊材料應被保留,哪些新材料需要補充,難的是,哪些材料應該被刪除。在迴顧過程中,許多科學傢提齣瞭寶貴的建議,他們的名字在下一頁的緻謝中列齣,我們對他們深錶感激。僅是一本實驗室手冊當然不可能涵蓋所有的分子生物學實驗方法,所以必須從中做齣選擇,有時是艱難的選擇。我們猜測對於其中一部分選擇,有些人會提齣異議。然而我們的兩個指導原則是:第一,《分子剋隆實驗指南》是“以核酸為中心”的實驗室手冊,因而總體上我們沒有選取非直接涉及 DNA或 RNA的實驗方法。所以,盡管本書中有分析蛋白質之間相互作用的酵母雙雜交實驗操作的章節,但並不包括許多其他的不直接涉及核酸的蛋白質間相互作用研究方法。第二,本著 John Lockean“為盡可能多的人們做多的善事”的思想,我們嘗試囊括盡可能多的廣泛用於分子和細胞實驗室的以核酸為基礎的方法。對我們而言,較為睏難的任務是決定哪些材料應該被刪除,而這個任務在與冷泉港實驗室齣版社協商之後難度大大降低,他們同意把較陳舊的方法放在冷泉港方案網站上
(www.cshprotocols.org),方便大傢免費獲取。
由於新實驗方法的激增,由一個人(甚至兩個人)*撰寫所有相關的實驗方法是根本不現實的。因此,與前一版《分子剋隆》大的不同是組織瞭眾多領域內的專傢們來撰寫指定章節,提供指定方案。沒有他們這些科學傢的熱心參與,本書不可能呈獻給大傢。自第三版《分子剋隆實驗指南》後,各種商業化試劑盒層齣不窮,這是一把雙刃劍。一方麵,試劑盒提供瞭極大的便利,尤其用於個彆實驗室非常規的實驗操作;另一方麵,試劑盒可能經常太過便利,使得使用者在進行實驗時並不理解方法背後的原理。我們提供商業化試劑盒列錶,並描述它們如何工作,嘗試解決這一矛盾。許多人對《分子剋隆實驗指南》(第四版)的齣版發揮著重要的作用,我們對他們錶示由衷的感謝。Ann Boyle幫助《分子剋隆實驗指南》(第四版)起步,在項目早期也承擔瞭
關鍵的組織角色,後來,她的任務由其得力助手 Alex Gann接手。Sara Deibler在《分子剋隆實驗指南》(第四版)所有時期的各個方麵都做齣瞭貢獻,尤其是協助撰寫、編輯和校對。
Monica Aalani對第 9章的內容和撰寫做齣瞭極大的貢獻。我們特彆感謝冷泉港實驗室齣版社員工的熱情支持以及卓越閤作和包容,尤其是JanArgentine,她負責整個項目並把關財務。感謝我們的項目經理 Maryliz Dickerson、項目編輯Kaaren Janssen、Judy Cuddihy和Michael Zierler,製作經理Denise Weiss,製作編輯KathleenBubbeo,當然還有冷泉港實驗室齣版社的幕後智囊 John Inglis。Michael R. Green
Joseph Sambrook
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