分子克隆实验指南-(上.中.下册)-(原书第四版) pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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MR格林 著

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• 生物技术
• 基因工程
• 克隆技术
• 生物科学
• 原书第四版
• 上中下册
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出版社： 科学

ISBN：9787030519979

商品编码：12033654938

出版时间：2017-03-01

基本信息

商品名称： 分子克隆实验指南-(上.中.下册)-(原书第四版)	出版社： 科学出版社	出版时间：2017-03-01
作者：M.R.格林	译者：贺福初	开本： 32开
定价： 598.00	页数：	印次： 1
ISBN号：9787030519979	商品类型：图书	版次： 1

内容提要

　　分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

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　　Originally published i English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Gree and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print iChina.Authorized Simplified Chinese translatio of the English editio? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translatio is published and sold by permissio of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

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《生物化学与分子生物学实验技术：原理与实践》 内容简介： 本书汇集了当代生物化学与分子生物学领域最核心、最前沿的实验技术，旨在为生命科学研究者、高校师生提供一套全面、深入、可操作性强的实验指导。全书结构严谨，内容详实，覆盖从基础理论到高级应用的广阔范围，是理解和掌握现代生命科学实验体系的必备参考书。 第一部分：生物分子基础操作与分离纯化技术 本部分聚焦于生物大分子（蛋白质、核酸、脂质）的提取、检测与纯化。我们详细阐述了不同来源生物材料（组织、细胞、微生物）的预处理方法，强调了在保持分子活性前提下的有效破碎技术，如高压匀浆、超声波破碎和酶解法。 在蛋白质化学部分，详细介绍了SDS-PAGE、非变性PAGE及等电聚焦电泳（IEF）的原理与操作细节，包括不同缓冲液体系的选择、凝胶配制的技术要点，以及如何根据实验目的选择合适的电泳迁移率分析方法。对于蛋白质的分离纯化，我们深入解析了不同层析技术：包括基于分子大小的凝胶过滤层析（SEC）、基于电荷的离子交换层析（IEX）——重点讨论了阴离子和阳离子交换的适用条件与洗脱梯度设计；以及基于特异性结合的亲和层析（AC），特别是金属离子螯合亲和层析（IMAC）在重组蛋白纯化中的应用，包括标签蛋白的引入、复性过程的控制。此外，本书还涵盖了蛋白质的定量分析，如Bradford法、Lowry法以及紫外吸收法（A280nm），并提供了不同方法的优缺点对比分析。 核酸部分侧重于DNA和RNA的提取、鉴定与质量控制。针对不同样本（血液、植物组织、微生物菌液）的特点，提供了改良的酚-氯仿抽提法和基于硅胶膜的快速提取技术，并着重讨论了如何有效去除RNA酶（RNase）的污染，确保RNA的完整性。核酸的分析与纯化部分，详细介绍了琼脂糖凝胶电泳的分辨率控制、分子量测定方法，以及利用梯度梯度凝胶或变性凝胶进行片段分析的技术。对于寡核苷酸的合成与修饰，我们也进行了必要的理论介绍与实践指导。 第二部分：分子生物学核心技术体系 本部分是全书的重点，系统介绍了现代分子生物学研究的基石技术。 聚合酶链式反应（PCR）技术的阐述细致入微，从引物设计原则（包括Tm值的精确计算、二级结构避免）开始，逐步深入到热循环条件的优化。我们详细区分了标准PCR、反转录PCR（RT-PCR）、定量实时PCR（qPCR，或称Real-Time PCR）的技术流程。在qPCR部分，重点讲解了染料法（如SYBR Green）和探针法（如TaqMan）的差异、标准曲线的建立、以及溶解曲线分析在特异性验证中的重要性。 核酸杂交技术的原理与应用是另一大模块。从经典的Southern Blotting（用于检测DNA序列）和Northern Blotting（用于检测RNA丰度）到荧光原位杂交（FISH），我们不仅描述了膜的选择、标记物的制备，还强调了高敏感度检测系统（如放射性标记、酶偶联显色或荧光标记）的实际操作要点。 基因克隆与重组DNA技术是本卷的核心。详细介绍了限制性内切酶的选择与酶切反应的优化，连接酶（T4 DNA Ligase）的活性与操作环境控制。针对载体构建，我们全面覆盖了质粒载体、噬菌体载体、人工染色体载体（YAC/BAC）的特性，以及如何高效地将目标基因插入载体，包括粘性末端连接、平末端连接和同源重组克隆技术。书中还收录了构建特定文库（如cDNA文库、基因组文库）的详细步骤。 第三部分：蛋白质表达、修饰与相互作用研究 本部分侧重于将基因信息转化为功能性蛋白质，并解析其在细胞内的行为。 蛋白质表达系统的构建与优化是关键。我们对比分析了原核系统（大肠杆菌）、酵母系统、昆虫细胞系统（Baculovirus）和哺乳动物细胞系统在表达目标蛋白方面的优势与局限性。对于在大肠杆菌中表达的包涵体蛋白，我们提供了系统的复性方案，包括去折叠、稀释复性、氧化复性等步骤的实验参数调控。 蛋白质的定量与活性分析方面，除了常规的ELISA（酶联免疫吸附测定）技术外，本书还详细介绍了用于高通量筛选的基于荧光或化学发光的方法。对于酶学研究，我们讨论了反应动力学（Michaelis-Menten方程的应用）、Km和Vmax的测定，以及抑制剂筛选的实验设计。 蛋白质相互作用研究是现代生物学的热点。我们深入讲解了酵母双杂交（Y2H）系统的筛选策略、实验对照的设置，以及如何将Y2H扩展到体外或体内系统（如Co-IP/Pull-Down实验）。对于时空动态的相互作用研究，书中引入了BRET/FRET技术的基本原理和应用实例。 第四部分：细胞生物学与成像技术前沿 本部分将分子技术与细胞功能研究相结合，重点介绍细胞水平的分析方法。 细胞培养与转染技术是基础。详细描述了无菌操作规范、培养基的优化、常见细胞系（如HeLa, HEK293）的维持，以及转染效率的评估。我们对比了脂质体介导、电穿孔法和病毒载体介导的转染技术，并提供了针对难转染细胞的优化建议。 免疫细胞化学分析是本卷的另一亮点。详细阐述了免疫组化（IHC）和免疫荧光（IF）的染色步骤，包括抗原修复技术的选择（热修复与酶修复）、一抗/二抗的筛选与稀释、封闭步骤的精确控制，以及荧光光谱的串扰避免。书中还包含了流式细胞术（FACS）的基本原理，用于细胞分群和凋亡/增殖的定量分析。 生物成像技术的介绍涵盖了从基础的明场/暗场显微镜到高级的共聚焦显微镜（Confocal Microscopy）。对于共聚焦，我们着重讲解了Z轴扫描、光学切片的原理，以及如何利用多色荧光标记技术进行三维重建，强调了荧光淬灭与漂白现象的控制。 全书内容紧密围绕实验的“为什么”和“如何做”展开，不仅提供了标准操作流程（SOP），更嵌入了大量的实验设计考量、常见问题（Troubleshooting）的诊断与解决方案，力求使读者能够独立、高效地完成各类前沿生物学实验。

评分☆☆☆☆☆

作为一名长期在实验台前摸索的研究生，我深知一本好的实验手册对于项目进展的决定性作用。这本书的价值，并不在于它提供了多少种“新颖”的、尚未被广泛验证的“黑科技”，而在于它对经典、核心分子克隆技术的梳理达到了出神入化的地步。很多最新的技术或许会过时，但那些经过时间考验的基础操作，才是我们立足科研的根本。这本书详尽地描述了每一步操作背后的生物学原理，这远比单纯的“照着做”要来得深刻。例如，在讨论基因沉默和过表达系统时，它不仅介绍了载体的选择标准，还深入分析了不同启动子在不同宿主细胞中的活性差异，这种对实验背景的深入挖掘，体现了作者极高的专业素养和对实验结果负责的态度。我感觉这本书就像是一份详尽的“故障排除手册”，无论遇到什么常见的实验失败，你都能在里面找到相似的案例分析和解决思路，极大地减少了试错成本。

评分☆☆☆☆☆

初次接触这套书的时候，我最直观的感受是它的“全面性”。它简直就像是分子生物学实验室里的“百科全书”，几乎涵盖了所有我能想到的分子克隆相关的技术点。从最基础的DNA提取纯化，到复杂的基因编辑前沿技术，这本书都没有放过，而且重点是，它对不同方法之间的优劣势进行了客观的比较。比如，在比较限制性内切酶消化、粘性末端连接和“一臂长”连接技术时，作者没有偏袒任何一方，而是清晰地列出了每种方法的适用范围、效率高低以及可能遇到的副反应，让读者可以根据自己的具体实验需求做出最明智的选择。这种不带倾向性的、基于事实的分析，是评价一本优秀工具书的关键指标。我特别欣赏它在描述实验步骤时，会特意用醒目的方式标注出那些“需要特别注意温度变化”或者“必须在无菌条件下操作”的关键节点，这些细节的强调，对于保证实验的重现性和成功率起到了保驾护航的作用，让人倍感贴心。

评分☆☆☆☆☆

这本书，说实话，拿到手里的时候，我还是挺激动的，毕竟是传说中的“分子克隆实验指南”，而且还是第四版，更新迭代了这么多次，想必内容一定是相当的扎实和权威。从拿到书本的那一刻起，我就忍不住翻阅起来，那厚度，那排版，就给人一种沉甸甸的专业感。我记得最开始看的是目录，那密密麻麻的章节标题，涉及了从基础的质粒构建到复杂的基因表达调控，每一个主题都像是通往科研前沿的一扇门。书中的插图和流程图也做得非常精细，即便是初次接触这些复杂概念的人，也能通过图示有一个直观的理解。我个人对其中关于PCR扩增优化那一章印象特别深刻，作者似乎很清楚地知道初学者在设计引物和优化反应条件时会遇到哪些“坑”，给出的建议非常具有实操性，不像有些教材那样只停留在理论层面，而是真正落到了“指南”二字上。翻阅过程中，我甚至能想象出作者们在实验室里摸爬滚打多年积累下来的经验，那种真诚的分享感，让人觉得这不是一本冷冰冰的教科书，更像是一位经验丰富的前辈在手把手地教导你。

评分☆☆☆☆☆

这本书的装帧和设计也颇具匠心，要知道，一本经常被翻阅的实验指南，很容易因为频繁的使用而磨损。这套书的纸张质量和装订都非常扎实，即使我把它放在实验台上，被各种溶液不小心溅到，或者反复翻阅查找，它依然保持着良好的形态。更重要的是，内容的更新，即第四版的面世，体现了作者们紧跟时代步伐的努力。我留意到其中关于下一代测序文库构建的部分，内容描述得非常现代化，没有采用过时的技术描述，这对于我们这些需要紧跟高通量技术发展的研究人员来说，提供了坚实的基础支撑。总而言之，这本书不仅是一份操作手册，更像是一份沉淀了数十年分子生物学智慧的结晶，它教会我的不仅是“怎么做实验”，更是“如何像一个成熟的科学家那样去思考实验设计和结果分析”。它让我对分子克隆技术有了更系统、更深入的理解，是科研路上不可或缺的良师益友。

评分☆☆☆☆☆

这本书的结构设计得非常巧妙，它不仅仅是把各种实验方法罗列出来，而是构建了一个逻辑清晰的知识体系。上下中下三册的划分，也体现了作者对知识深度的考量，从基础理论到高级应用，循序渐进，丝毫没有让人感到突兀。比如，在介绍完各种酶的特性和作用机制后，紧接着就引入了如何利用这些酶进行具体的DNA操作，这种“理论支撑实践”的编排方式，极大地提高了学习效率。我记得有一次，我在进行一个比较棘手的载体构建实验时卡住了，翻阅这本书的特定章节，里面关于连接效率提升的“小贴士”——那些在正文里不显眼但至关重要的细节——一下子点醒了我。那种豁然开朗的感觉，就像是迷雾中找到了灯塔。而且，这本书的语言风格极其严谨，用词精准，没有丝毫含糊不清的地方，这对于需要精确执行实验的科研工作者来说，是至关重要的品质。它迫使你用最标准的术语去理解和描述分子生物学过程，对提升专业素养帮助巨大。

评分☆☆☆☆☆

工作需要，很不错的一本书

评分☆☆☆☆☆

东西不错，很实惠，。

评分☆☆☆☆☆

工作需要，很不错的一本书

评分☆☆☆☆☆

排版质量大有提高。

评分☆☆☆☆☆

感觉还可以，整体还不错…

评分☆☆☆☆☆

排版质量大有提高。

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不错，好书～

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工作需要，很不错的一本书