正如所有的亞細胞的蛋白質組學研究,提取細胞壁蛋白質組的關鍵因素是提取的蛋白質片段不能被來自細胞其他部位的蛋白質汙染。通常情況下用兩種方法來分離細胞壁細胞壁的蛋白質。非破裂和破裂蛋白質提取兩種方法各自有其優缺點,特彆是有關蛋白質汙染和改進當前的提取方法。第二個重要方麵是多糖多酚類汙染物的清除,它們在雙嚮電泳中産生不良作用。過去,細胞培養為細胞壁蛋白質的提取提供瞭均一並且相對“乾淨”的組織來源。雖然分化的組織在生物學研究上相關性更強,但是研究起來更加復雜和睏難,目前對於這些組織的大規模的蛋白質組的成果相對比較新。本章簡單總結現有細胞壁蛋白質提取方法並且描述一種從紫花苜蓿莖中提取細胞壁蛋白質的具體方法。
評分從5種植物體中提取隻含有初生細胞壁的蛋白質[3]是分離和鑒定大量細胞壁蛋白質的嘗試之一。通過過濾收集細胞,通過在5種不同的緩衝液中攪拌細胞提取蛋白質。緩衝液包含0.2mol/LCaCl2、50mmol/LCDTA、50mmol/L乙酸鈉(pH6.5)、2mmol/L的二硫蘇糖醇、1mol/LNaCl和0.2mol/L硼酸,pH7.5,緩衝液用於後續和非後續的提取體係。Blee等[4]采用瞭同時具有初生細胞壁和次生細胞壁的轉化瞭的煙草的懸浮細胞係作為活細胞直接提取總蛋白的來源。蛋白質提取用0.2mol/LCaCl2、50mmol/LCDTA。
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評分瀋世華,中國科學院植物研究所研究員,博士生導師。兼任中國科學院唐山高新技術研發與轉化中心工程植物事業部部長,中國植物生理學會植物生物質與生物能源專業委員會委員。
評分 評分 評分 評分科學齣版社的生命科學實驗指南係列一般印刷都不錯,隻是這本書印刷不好,字跡淡,書的價格也不低啊,竟然給印成這個樣子,令人無語!究竟問題齣在哪裏瞭?
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