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评分从5种植物体中提取只含有初生细胞壁的蛋白质[3]是分离和鉴定大量细胞壁蛋白质的尝试之一。通过过滤收集细胞,通过在5种不同的缓冲液中搅拌细胞提取蛋白质。缓冲液包含0.2mol/LCaCl2、50mmol/LCDTA、50mmol/L乙酸钠(pH6.5)、2mmol/L的二硫苏糖醇、1mol/LNaCl和0.2mol/L硼酸,pH7.5,缓冲液用于后续和非后续的提取体系。Blee等[4]采用了同时具有初生细胞壁和次生细胞壁的转化了的烟草的悬浮细胞系作为活细胞直接提取总蛋白的来源。蛋白质提取用0.2mol/LCaCl2、50mmol/LCDTA。
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评分另一种从活细胞中洗脱细胞壁的蛋白质的方法是利用质膜的质壁分离使质膜萎缩脱离细胞壁。Borderies等[10]用活拟南芥悬浮培养细胞来提取细胞壁松散结合的蛋白质。培养物首先用50%甘油质壁分离,然后相继用不同的缓冲液提取。利用两种不同的提取体系——NaCl、EDTA、0.2mol/LCaCl2或NaCl、EDTA、2mol/LLiCl来优化方法并且减少提取处理所造成的膜渗透的问题。这些处理中的几个导致细胞壁蛋白污染上胞内蛋白,因此要利用透射电子显微镜来验证质膜的完整性。
评分已经从挪威云杉木质部悬浮培养的活细胞中提取了细胞壁的蛋白质。通过在1mol/L氯化钠的缓冲液中孵育的方法将细胞壁蛋白质从经过过滤和洗涤的细胞中洗脱下来。分离的细胞进行匀浆,随之蛋白质被释放,但在离子作壁蛋白质中纯化出了与延伸相关的细胞壁蛋白质[17洗脱细胞壁的蛋白质。通过离子交换,氯化钙与结合蛋
评分《生命科学实验指南系列:植物蛋白质组学实验指南》由国际植物蛋白质组学研究领域的数位专家合作编写而成,系统介绍了植物细胞总蛋白、细胞器蛋白的分离提取,蛋白质的修饰,经典的蛋白质双向电泳、质谱技术等植物蛋白质组学研究的常用技术方法。对实验流程的描述简洁易懂,并配有实例,同时对关键步骤做了特别注释,无论对教学还是科研都有很高的参考价值。
评分植物蛋白质组学实验指南
评分 评分沈世华,中国科学院植物研究所研究员,博士生导师。兼任中国科学院唐山高新技术研发与转化中心工程植物事业部部长,中国植物生理学会植物生物质与生物能源专业委员会委员。
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