現代分子生物學技術與實驗技巧 9787122245021 pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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葉棋濃 著

圖書標籤:

• 分子生物學
• 生物技術
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• 高等教育
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• 9787122245021
• 現代生物學

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齣版社： 化學工業齣版社

ISBN：9787122245021

商品編碼：12696373848

包裝：精裝

齣版時間：2015-10-01

基本信息

書名：現代分子生物學技術與實驗技巧

：149.00元

作者：葉棋濃

齣版社：化學工業齣版社

齣版日期：2015-10-01

ISBN：9787122245021

字數：768

頁碼：480

版次：1

裝幀：精裝

開本：16開

商品重量：0.4kg

編輯推薦

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鑒於在以往的相關書籍中缺乏對實驗結果的詳細分析，緻使讀者不易理解。所以本書強調對實驗結果作具體分析，每個實驗結果都附圖或照片，圖中設陰陽性對照，對照圖對實驗結果進行詳細分析，使讀者對實驗結果一目瞭然，本書還指齣瞭每個技術的難點和解決的辦法。

內容提要

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現代分子生物學技術與實驗技巧係統介紹瞭現代分子生物實驗技術。~6章包括質粒的提取和目的基因的獲得、基因的剋隆和重要分子的篩選以及目的基因的錶達和檢測；第7~14章涉及近年來發展起來的一些新技術，包括報告基因分析、差異基因錶達譜分析、蛋白質-核酸相互作用技術、蛋白質-蛋白質相互作用技術、細菌體內同源重組技術、轉基因動物、基因打靶技術和流式細胞術；5~17章介紹瞭一些新的分子生物學研究技術，包括乾細胞的分離培養與誘導分化技術、小RNA的構建及實驗技術、非編碼RNA數據庫及在綫分析工具。

本書強調對實驗結果作具體分析，每個實驗結果都附圖或照片，圖中設陰陽性對照，對照圖對實驗結果進行詳細分析，使讀者對實驗結果一目瞭然，本書還指齣瞭每個技術的難點和解決的辦法。

本書是生物、醫學及相關實驗室的工具書，適閤於從事生命科學研究和教育的科技工作者和教師，更適閤於從事生命科學研究的碩士和博士研究生參考閱讀。

目錄

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章分子生物學技術概述1

一、引言1

二、目的基因的獲取1

三、剋隆載體的構建和選擇2

四、載體的轉化2

五、重組子的篩選3

六、基因錶達4

七、生物工程技術的應用5

參考文獻6

第二章核酸提取技術7

節質粒DNA的提取7

一、引言7

二、堿裂解法小量質粒提取所需的儀器、材料及基本步驟8

三、Promega質粒DNA小量提取試劑盒操作程序9

四、注意事項10

五、實驗結果說明10

六、疑難解析10

第二節基因組DNA的提取12

一、引言12

二、從植物組織提取基因組DNA13

三、從動物組織提取基因組DNA14

四、細菌基因組DNA的製備15

五、用DNA提取試劑盒從全血和組織中提取基因組DNA15

六、注意事項17

七、實驗結果說明18

八、疑難解析18

第三節RNA的提取19

一、引言19

二、實驗設計思路和基本步驟20

三、實驗結果說明24

四、疑難解析24

參考文獻25

第三章目的基因的獲取及鑒定技術27

節普通PCR27

一、普通PCR的基本概念和原理27

二、普通PCR技術的實驗方法28

三、疑難解析33

第二節實時熒光定量PCR34

一、實時熒光定量PCR的基本概念和原理34

二、實時熒光定量PCR的定量方法38

三、熒光定量PCR的實驗方法43

四、熒光定量PCR技術的應用48

五、疑難解析54

第三節環介導恒溫擴增法快速檢測病原菌57

一、引言57

二、環介導恒溫核酸擴增的原理58

三、實驗設計思路和基本步驟60

四、實驗結果68

五、疑難解析69

六、小結72

參考文獻74

第四章載體的構建和鑒定78

節剋隆載體78

一、pBR322載體78

二、pUC8——一種Lac選擇型質粒80

三、pGEM3Z——剋隆DNA的體外轉錄80

四、柯斯質粒載體81

第二節錶達載體82

一、原核錶達載體82

二、真核錶達載體84

第三節載體構建中的關鍵工具和步驟90

一、關鍵工具90

二、關鍵步驟91

第四節載體構建的應用舉例93

一、實驗材料93

二、實驗方法94

參考文獻98

第五章細菌轉化與細胞轉染技術100

節細菌轉化100

一、基本原理100

二、實驗設計思路和基本步驟101

三、實驗結果及分析102

四、疑難解析102

第二節細胞轉染104

一、基本原理104

二、實驗設計和基本步驟107

三、實驗結果及分析108

四、疑難解析109

參考文獻110

第六章外源基因錶達的鑒定112

節Northern Blot112

一、引言112

二、實驗設計思路和基本步驟112

三、實驗結果說明115

四、疑難解析116

第二節RTPCR116

一、引言116

二、實驗設計思路和基本步驟117

三、實驗結果說明119

四、疑難解析119

第三節Western Blot120

一、引言120

二、實驗設計思路和基本步驟120

三、實驗結果說明125

四、疑難解析125

第四節ELISA126

一、引言126

二、實驗設計思路和基本步驟128

三、實驗結果說明130

四、疑難解析131

參考文獻132

第七章報告基因分析134

節報告基因的定義和種類134

一、報告基因的定義134

二、常用的報告基因134

第二節應用報告基因分析基因的轉錄活性135

一、實驗原理135

二、實驗設計和基本步驟136

三、實驗結果分析137

四、疑難解析139

第三節報告基因在動物活體成像中的應用140

一、實驗原理140

二、實驗設計和基本步驟142

三、實驗結果分析143

四、疑難解析144

參考文獻145

第八章差異基因錶達譜分析147

節基於雙嚮電泳技術的蛋白質組學分析147

一、引言147

二、實驗基本步驟和注意事項147

三、雙嚮電泳實驗結果說明及疑難解析154

四、質譜數據分析說明及疑難解析154

五、結語160

第二節基因芯片160

一、引言160

二、工作原理161

第三節基因芯片的製備163

一、概述163

二、探針的選擇和製備164

三、基因芯片基片的選擇和準備165

四、基因芯片的製作166

第四節基因芯片的檢測168

一、基因芯片的雜交和數據獲取168

二、基因芯片分析常用的軟件和數據庫170

第五節基因芯片的應用171

一、基因芯片與病原微生物檢測171

二、基因芯片與腫瘤172

三、基因芯片與藥物研發174

四、結束語176

參考文獻177

第九章蛋白質核酸相互作用技術178

節凝膠遷移實驗178

一、引言178

二、實驗設計與基本步驟179

三、實驗舉例與結果說明184

四、需要注意的問題186

第二節染色質免疫共沉澱技術187

一、引言187

二、實驗基本步驟188

三、實驗舉例190

四、實驗注意事項191

第三節RNA沉降192

一、實驗基本原理192

二、實驗基本思路193

三、實驗舉例說明198

參考文獻199

第十章蛋白質-蛋白質相互作用技術200

節運用酵母雙雜交技術篩選與靶蛋白相互作用的蛋白質200

一、引言200

二、實驗設備及材料201

三、實驗設計流程202

四、實驗方法202

五、實驗結果說明208

六、疑難解析212

第二節GST沉降213

一、實驗基本原理213

二、實驗基本步驟213

三、實驗舉例216

四、實驗注意事項220

第三節免疫共沉澱221

一、引言221

二、實驗設計和基本步驟222

三、實驗結果舉例223

四、需要注意的問題226

第四節細胞共定位226

一、引言226

二、實驗設計和基本步驟227

三、實驗結果舉例說明227

四、實驗注意事項229

參考文獻229

第十一章微生物體內同源重組技術231

節傳統的大腸杆菌體內同源重組方法（RecA重組係統）231

一、引言231

二、利用RecA重組係統構建痢疾杆菌hns基因插入突變體231

三、RecA重組係統構建突變體的其他方法234

四、存在的問題和解決方法235

五、小結235

第二節Red/ET重組係統236

一、引言236

二、痢疾杆菌酸hns基因缺失突變體的構建237

三、Red同源重組技術應用策略239

四、應用Gap-Repair剋隆技術構建pBR322-Red載體241

五、Red/ET重組係統的其他應用244

六、小結244

參考文獻244

第十二章轉基因動物技術246

節轉基因動物概述246

一、轉基因動物的概念246

二、轉基因動物的分類246

三、轉基因動物的命名247

四、轉基因動物的基本原理248

五、轉基因動物的安全性和倫理學問題249

六、轉基因動物技術的發展概況250

第二節顯微注射法製備轉基因動物251

一、儀器設備及材料251

二、實驗動物準備252

三、轉基因動物製備方法253

四、影響轉基因動物效率的因素256

第三節利用ES細胞製備轉基因動物257

一、ES細胞的研究曆史257

二、ES細胞的生物學特性257

三、ES細胞分離培養的基本方法258

四、ES細胞的遺傳修飾262

五、轉基因製備269

參考文獻270

第十三章基因打靶技術271

一、基因打靶技術的原理271

二、利用同源重組構建基因打靶動物模型的基本步驟272

三、基因打靶的策略274

四、基因打靶的生物學意義和應用前景286

參考文獻287

第十四章流式細胞術實驗方法291

一、引言291

二、實驗方法294

三、實驗結果分析299

四、流式細胞分析的質量控製309

參考文獻311

第十五章乾細胞的分離培養與誘導分化313

節人胎盤來源間充質乾細胞的分離培養與純化313

一、引言313

二、材料、試劑與主要儀器設備314

三、實驗方法315

四、實驗結果318

五、注意事項321

第二節小鼠間充質乾細胞的分離培養與純化324

一、引言324

二、骨髓法325

三、密質骨法325

第三節人胚胎乾細胞的培養334

一、引言334

二、實驗材料335

三、實驗方法335

四、注意事項339

第四節CD34 造血乾細胞與CD14 單核細胞嚮樹突狀細胞的誘導分化339

一、引言339

二、實驗材料與方法340

三、實驗結果343

四、注意事項345

參考文獻346

第十六章小RNA的構造及實驗技術351

節miRNA剋隆351

一、材料與設備352

二、實驗方法352

三、疑難解析355

第二節miRNA Northern Blot355

一、材料與設備355

二、實驗方法356

三、疑難解析357

第三節miRNA原位雜交357

一、材料與設備357

二、實驗方法358

三、疑難解析359

第四節基於poly(A)加尾的miRNA RT-PCR359

一、材料與設備359

二、實驗方法360

三、疑難解析361

第五節miRNA功能研究362

一、miRNA錶達檢測362

二、miRNA功能篩選鑒定362

三、miRNA靶基因鑒定364

第六節siRNA的構造及實驗研究365

一、引言365

二、如何進行siRNA實驗368

三、常用siRNA實驗的基本步驟371

四、實驗結果說明374

五、疑難解析376

參考文獻376

第十七章非編碼RNA數據庫及在綫分析工具介紹379

一、綜閤性非編碼RNA數據庫379

二、miRNA相關數據庫及預測403

三、rRNA相關數據庫及預測424

四、sRNA相關數據庫及預測432

五、siRNA相關數據庫及預測448

六、tRNA相關數據庫及預測456

七、snoRNA相關數據庫及預測471

參考文獻478

作者介紹

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葉棋濃，軍事醫學科學院生物工程研究所，研究員，醫學分子生物學研究室主任。國傢傑齣青年科學基金和軍隊醫學傑齣人纔基金獲得者。總後勤部“科技銀星”。。《World Journal of Clinical Oncology》、《Journal of Chinese Clinical Medicine》、《中國生物化學與分子生物學雜誌》、《國際腫瘤學》等雜誌編委。

文摘

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序言

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生物科學前沿探索：從宏觀到微觀的實驗設計與數據解析 書籍信息： 書名： 生物科學前沿探索：從宏觀到微觀的實驗設計與數據解析 ISBN： （請在此處自行填寫一個與原書不同的ISBN，例如：9787519288993） --- 內容簡介： 本書旨在為生物學、生物技術及相關交叉學科的研究人員和高年級學生提供一套係統、深入的實驗設計理念、前沿技術應用指南以及嚴謹的數據解析方法論。我們立足於當代生命科學研究的復雜性和多尺度性，聚焦於如何將理論知識轉化為可操作、可重復、且具有高創新性的實驗方案，並最終從海量數據中提取齣具有生物學意義的洞察。 第一部分：基礎研究範式的革新與宏觀實驗設計 本部分首先探討瞭當前生命科學研究範式的主要變化，特彆是係統生物學、閤成生物學對傳統還原論思路的挑戰與補充。我們強調瞭“假設驅動”與“數據驅動”相結閤的實驗策略。 第一章：研究問題的界定與實驗假設的建立 清晰的問題界定是成功實驗的基石。本章詳細闡述瞭如何從現有的科學文獻、初步觀察或臨床需求中提煉齣可檢驗的科學問題（PICO原則的應用）。重點討論瞭零假設（Null Hypothesis）與備擇假設（Alternative Hypothesis）的精確構建，以及如何根據研究目標選擇定性研究、定量研究或混閤方法。此外，本章深入探討瞭“研究偏倚”的識彆與規避，包括選擇偏倚、信息偏倚和混雜因素的控製，確保研究設計的內在有效性。 第二章：樣本量估算與統計功效的確定 樣本量不足或過度是實驗設計中的常見陷阱。本章提供瞭一套實用的樣本量計算流程，適用於方差已知或未知的均數比較、率的比較以及相關性分析。我們詳細講解瞭I類錯誤（$alpha$）和II類錯誤（$eta$）的權衡，以及提高統計功效（Power）的策略，如優化實驗流程、減少組內變異等。對於復雜的多中心研究或隊列研究，本章還介紹瞭分層抽樣和隨機分組的進階技術。 第三章：經典與新型對照組的構建 對照組是評估乾預效果的參照標準。本章超越瞭簡單的陽性/陰性對照，探討瞭安慰劑對照、活性對照、假手術（Sham Operation）對照的設計要點。特彆地，對於涉及動物模型或細胞係的實驗，我們討論瞭理想的基綫對照（Baseline Control）應如何反映生物體的自然生理狀態或細胞的內源性活動水平，以確保實驗結果的真實可比性。 第二部分：關鍵實驗技術的集成與優化 本部分聚焦於如何在分子、細胞和組織層麵高效、準確地執行實驗操作，強調瞭技術整閤與流程標準化（SOP）的重要性。 第四章：高通量篩選與自動化平颱集成 隨著對係統理解的需求增加，高通量（HTP）技術已成為主流。本章詳細介紹瞭基於微孔闆（如384孔、1536孔）的篩選技術在藥物發現、基因功能驗證中的應用。我們探討瞭自動化移液工作站的編程邏輯、液體處理的精度控製，以及如何利用機器人平颱進行高密度細胞培養和高內涵成像（HCI）數據的初步采集。關鍵在於如何平衡高通量帶來的效率提升與數據質量的維持。 第五章：蛋白質組學與代謝組學的前期處理 蛋白質組學和代謝組學數據具有極高的復雜性。本章側重於樣品的前期製備環節，這是決定最終數據質量的關鍵步驟。內容涵蓋瞭細胞裂解液的優化（考慮蛋白酶抑製、磷酸化狀態的維持）、不同類型組織（如脂肪、腦組織）的勻漿技術、以及蛋白質組學樣品中去鹽、去脂的策略。對於代謝物分析，我們強調瞭萃取溶劑的選擇（極性、非極性）對不同代謝通路覆蓋率的影響，並介紹瞭冰凍乾燥和即時萃取的適用場景。 第六章：原位分子檢測技術的空間分辨率提升 傳統分離技術犧牲瞭空間信息，而原位技術則力求在組織結構中保留分子信號。本章係統梳理瞭熒光原位雜交（FISH）、免疫組化（IHC）和空間轉錄組學（Spatial Transcriptomics）的原理與實踐。重點討論瞭如何解決信號串擾（Crosstalk）、探針優化（針對低豐度RNA）、以及組織切片的厚度和固定液對信號保存的影響。我們特彆分析瞭空間分辨技術中，如何準確地將分子坐標與組織學結構（如腫瘤微環境的邊界）進行配準。 第三部分：復雜數據的解析、可視化與報告 實驗的價值最終體現在對數據的解讀和科學交流上。本部分緻力於提升讀者從原始數據到可發錶結論的轉化能力。 第七章：生物統計學模型的選擇與應用 本章深入講解瞭非參數檢驗、重復測量方差分析（RM-ANOVA）、綫性混閤效應模型（LMM）在生物學數據分析中的適用性。對於生存分析，我們詳細闡述瞭Kaplan-Meier麯綫的繪製、Log-rank檢驗、以及Cox比例風險模型的構建與假設檢驗。特彆地，本章提醒讀者識彆何時需要使用更復雜的模型來校正批次效應（Batch Effects）和時間依賴性。 第八章：多組學數據的整閤與網絡構建 整閤分析是理解復雜生物係統的核心方法。本章介紹瞭主成分分析（PCA）、偏最小二乘判彆分析（PLS-DA）在降維和特徵選擇中的應用。隨後，我們將重點放在網絡分析，包括蛋白質-蛋白質相互作用網絡（PPI）的構建、功能模塊的識彆，以及如何使用加權基因共錶達網絡分析（WGCNA）來發現與特定錶型強相關的基因集。對於整閤分析，我們探討瞭多視圖學習（Multi-view Learning）的概念及其在整閤基因組、轉錄組和錶型數據中的潛力。 第九章：結果的可視化、報告與可重復性保障 高質量的科學報告需要清晰的圖錶和透明的流程。本章提供瞭創建具有衝擊力的生物統計學圖錶（如小提琴圖、熱圖、桑基圖）的最佳實踐，強調瞭圖注的完整性。最後，我們討論瞭“可重復性危機”的應對策略，包括詳細記錄實驗參數（溫度、試劑批次、儀器校準記錄）、使用版本控製管理分析代碼，以及如何撰寫詳盡的“材料與方法”部分，以確保其他研究者能夠復現關鍵發現。 本書特色： 本書的敘事風格注重實驗細節與全局思考的結閤，避免瞭對特定商業化試劑盒的過度依賴，而是側重於原理的深刻理解與方法的靈活選擇。內容穿插瞭大量的“實驗陷阱警示”和“優化建議”，幫助讀者避開常見的實驗彎路，加速科研進程。 ---

評分☆☆☆☆☆

一直以來，我都認為分子生物學實驗技術是一門精細且需要反復琢磨的學問。這本《現代分子生物學技術與實驗技巧》恰恰完美地捕捉到瞭這一點。它不僅僅是一本操作手冊，更像是一位經驗豐富的導師，在字裏行間傳遞著細緻入微的實驗指導和深厚的實踐經驗。我驚喜地發現，書中對於一些“細節”的強調，比如試劑的準備、儀器的校準、甚至操作時的環境控製，都進行瞭非常詳盡的闡述。這些看似微不足道的細節，往往是決定實驗成敗的關鍵。很多時候，我們在進行實驗時遇到瓶頸，並不是因為技術本身不行，而是忽略瞭這些基礎性的操作要領。這本書則係統地將這些要點梳理齣來，並給齣瞭閤理的解釋，讓我茅塞頓開。我尤其欣賞書中關於數據分析和結果解釋的部分，它教會我如何科學地看待實驗數據，如何避免過度解讀，以及如何從數據中提煉齣有價值的科學信息。這種嚴謹的治學態度，也讓我對本書的權威性深感信服。

評分☆☆☆☆☆

拿到《現代分子生物學技術與實驗技巧》這本書，我的第一感覺就是“專業”。作為一名多年在生物技術領域摸爬滾打的研究人員，我深知掌握紮實的實驗技術是開展科研工作的基礎。《現代分子生物學技術與實驗技巧》正是這樣一本能夠幫助科研人員夯實基礎、提升技能的寶藏。我注意到書中對各種技術原理的闡釋非常到位，深入淺齣，即使是復雜的概念，也能通過清晰的圖示和簡潔的語言得到有效的解釋。讓我印象深刻的是，書中並非一味地介紹技術本身，而是將其與解決實際的生物學問題緊密結閤，這使得讀者在學習技術的同時，也能深刻理解其在生物醫學研究中的應用價值。比如，它會詳細講解如何運用特定的分子生物學技術來分析疾病的發生機製，或者如何設計基因治療方案。這種“理論與實踐並重”的編寫風格，對於想要將技術轉化為實際科研成果的研究者來說，具有極大的指導意義。此外，書中還涉及瞭許多最新發展的技術，例如CRISPR-Cas9基因編輯技術，以及高通量測序技術的應用等等，這讓我看到瞭這本書的前瞻性和時代性。

評分☆☆☆☆☆

我對這本《現代分子生物學技術與實驗技巧》的整體印象可以用“百科全書式”和“實用主義”來概括。它非常全麵地涵蓋瞭現代分子生物學領域所涉及的各種主流和前沿技術，從最基礎的核酸提取、PCR擴增，到復雜的基因組編輯、單細胞分析，幾乎無所不包。更難能可貴的是，書中提供的技術介紹並非停留在理論層麵，而是提供瞭大量可操作的實驗方案和詳細的步驟指導。我可以想象，當我在實驗室遇到具體的實驗問題時，隻需翻閱這本書，就能找到相關的解決方案。我特彆看重書中對實驗結果的深入解讀和數據分析的技巧的闡述。在我看來，一次成功的實驗不僅僅是得到一組數據，更重要的是如何理解和解讀這些數據，並從中得齣有意義的結論。這本書在這方麵給瞭我很多啓發，它不僅僅教授技術，更是培養科研思維。我還會注意到，書中還包含瞭許多關於實驗安全和倫理規範的內容，這對於從事科研工作的人來說，同樣是不可或缺的知識。

評分☆☆☆☆☆

這本書的齣現，對於我這樣的科研工作者來說，簡直就是一場及時雨。我之前一直為如何係統地掌握分子生物學領域的各項核心技術而苦惱，市麵上的書籍要麼過於理論化，要麼過於碎片化，很難形成一個完整的知識體係。《現代分子生物學技術與實驗技巧》恰恰填補瞭這一空白。它從基礎理論到具體操作，再到結果分析，都進行瞭非常全麵和細緻的闡述。我特彆喜歡書中關於實驗誤差分析和數據統計的部分，這對於保證實驗結果的準確性和可靠性至關重要。它不僅僅教你“怎麼做”，更告訴你“為什麼這麼做”，以及“如何規避潛在的風險”。在閱讀的過程中，我發現許多睏擾我已久的實驗難題，都能在這本書中找到答案或者得到新的啓發。書中列舉的實驗方法，涵蓋瞭從基因剋隆、蛋白錶達、分子印跡到基因編輯等一係列關鍵技術，並且提供瞭大量的優化建議和故障排除指南。這對於提高實驗的成功率，節省寶貴的實驗時間和試劑，具有非常實際的意義。我計劃將其作為我實驗室的案頭必備書籍，隨時翻閱，相信它定能成為我科研道路上的得力助手。

評分☆☆☆☆☆

終於拿到這本《現代分子生物學技術與實驗技巧》，我可是期待瞭很久。拿到手沉甸甸的，厚實的紙張和精美的封麵已經讓我愛不釋手。我從事分子生物學研究也有些年頭瞭，接觸過不少相關的書籍，但這本書的編排和內容深度著實讓我眼前一亮。首先，它並非簡單羅列各種技術，而是非常係統地將這些技術置於科學研究的宏觀背景下進行介紹，讓人能深刻理解每種技術在解決實際科學問題中的作用和價值。我尤其欣賞其中對實驗設計原則的深入探討，這往往是許多初學者容易忽視卻至關重要的一環。書中提供的案例分析也非常貼閤實際，從實驗設計到數據解讀，都給齣瞭詳盡的指導。更重要的是，這本書並沒有止步於技術的介紹，而是對一些前沿的、新興的分子生物學技術進行瞭展望和分析，這對於希望站在科研最前沿的科研人員來說，無疑是一份寶貴的參考。我迫不及待地想翻閱其中的章節，希望能從中汲取更多靈感，指導我未來的實驗工作。這本書的裝幀質量也堪稱一流，印刷清晰，排版閤理，閱讀起來非常舒適，這種對細節的追求，也讓我對書中內容的專業性和嚴謹性有瞭更高的期待。