现代分子生物学技术与实验技巧 9787122245021 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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叶棋浓 著

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• 9787122245021
• 现代生物学

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出版社： 化学工业出版社

ISBN：9787122245021

商品编码：12696373848

包装：精装

出版时间：2015-10-01

基本信息

书名：现代分子生物学技术与实验技巧

：149.00元

作者：叶棋浓

出版社：化学工业出版社

出版日期：2015-10-01

ISBN：9787122245021

字数：768

页码：480

版次：1

装帧：精装

开本：16开

商品重量：0.4kg

编辑推荐

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鉴于在以往的相关书籍中缺乏对实验结果的详细分析，致使读者不易理解。所以本书强调对实验结果作具体分析，每个实验结果都附图或照片，图中设阴阳性对照，对照图对实验结果进行详细分析，使读者对实验结果一目了然，本书还指出了每个技术的难点和解决的办法。

内容提要

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现代分子生物学技术与实验技巧系统介绍了现代分子生物实验技术。~6章包括质粒的提取和目的基因的获得、基因的克隆和重要分子的筛选以及目的基因的表达和检测；第7~14章涉及近年来发展起来的一些新技术，包括报告基因分析、差异基因表达谱分析、蛋白质-核酸相互作用技术、蛋白质-蛋白质相互作用技术、细菌体内同源重组技术、转基因动物、基因打靶技术和流式细胞术；5~17章介绍了一些新的分子生物学研究技术，包括干细胞的分离培养与诱导分化技术、小RNA的构建及实验技术、非编码RNA数据库及在线分析工具。

本书强调对实验结果作具体分析，每个实验结果都附图或照片，图中设阴阳性对照，对照图对实验结果进行详细分析，使读者对实验结果一目了然，本书还指出了每个技术的难点和解决的办法。

本书是生物、医学及相关实验室的工具书，适合于从事生命科学研究和教育的科技工作者和教师，更适合于从事生命科学研究的硕士和博士研究生参考阅读。

目录

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章分子生物学技术概述1

一、引言1

二、目的基因的获取1

三、克隆载体的构建和选择2

四、载体的转化2

五、重组子的筛选3

六、基因表达4

七、生物工程技术的应用5

参考文献6

第二章核酸提取技术7

节质粒DNA的提取7

一、引言7

二、碱裂解法小量质粒提取所需的仪器、材料及基本步骤8

三、Promega质粒DNA小量提取试剂盒操作程序9

四、注意事项10

五、实验结果说明10

六、疑难解析10

第二节基因组DNA的提取12

一、引言12

二、从植物组织提取基因组DNA13

三、从动物组织提取基因组DNA14

四、细菌基因组DNA的制备15

五、用DNA提取试剂盒从全血和组织中提取基因组DNA15

六、注意事项17

七、实验结果说明18

八、疑难解析18

第三节RNA的提取19

一、引言19

二、实验设计思路和基本步骤20

三、实验结果说明24

四、疑难解析24

参考文献25

第三章目的基因的获取及鉴定技术27

节普通PCR27

一、普通PCR的基本概念和原理27

二、普通PCR技术的实验方法28

三、疑难解析33

第二节实时荧光定量PCR34

一、实时荧光定量PCR的基本概念和原理34

二、实时荧光定量PCR的定量方法38

三、荧光定量PCR的实验方法43

四、荧光定量PCR技术的应用48

五、疑难解析54

第三节环介导恒温扩增法快速检测病原菌57

一、引言57

二、环介导恒温核酸扩增的原理58

三、实验设计思路和基本步骤60

四、实验结果68

五、疑难解析69

六、小结72

参考文献74

第四章载体的构建和鉴定78

节克隆载体78

一、pBR322载体78

二、pUC8——一种Lac选择型质粒80

三、pGEM3Z——克隆DNA的体外转录80

四、柯斯质粒载体81

第二节表达载体82

一、原核表达载体82

二、真核表达载体84

第三节载体构建中的关键工具和步骤90

一、关键工具90

二、关键步骤91

第四节载体构建的应用举例93

一、实验材料93

二、实验方法94

参考文献98

第五章细菌转化与细胞转染技术100

节细菌转化100

一、基本原理100

二、实验设计思路和基本步骤101

三、实验结果及分析102

四、疑难解析102

第二节细胞转染104

一、基本原理104

二、实验设计和基本步骤107

三、实验结果及分析108

四、疑难解析109

参考文献110

第六章外源基因表达的鉴定112

节Northern Blot112

一、引言112

二、实验设计思路和基本步骤112

三、实验结果说明115

四、疑难解析116

第二节RTPCR116

一、引言116

二、实验设计思路和基本步骤117

三、实验结果说明119

四、疑难解析119

第三节Western Blot120

一、引言120

二、实验设计思路和基本步骤120

三、实验结果说明125

四、疑难解析125

第四节ELISA126

一、引言126

二、实验设计思路和基本步骤128

三、实验结果说明130

四、疑难解析131

参考文献132

第七章报告基因分析134

节报告基因的定义和种类134

一、报告基因的定义134

二、常用的报告基因134

第二节应用报告基因分析基因的转录活性135

一、实验原理135

二、实验设计和基本步骤136

三、实验结果分析137

四、疑难解析139

第三节报告基因在动物活体成像中的应用140

一、实验原理140

二、实验设计和基本步骤142

三、实验结果分析143

四、疑难解析144

参考文献145

第八章差异基因表达谱分析147

节基于双向电泳技术的蛋白质组学分析147

一、引言147

二、实验基本步骤和注意事项147

三、双向电泳实验结果说明及疑难解析154

四、质谱数据分析说明及疑难解析154

五、结语160

第二节基因芯片160

一、引言160

二、工作原理161

第三节基因芯片的制备163

一、概述163

二、探针的选择和制备164

三、基因芯片基片的选择和准备165

四、基因芯片的制作166

第四节基因芯片的检测168

一、基因芯片的杂交和数据获取168

二、基因芯片分析常用的软件和数据库170

第五节基因芯片的应用171

一、基因芯片与病原微生物检测171

二、基因芯片与肿瘤172

三、基因芯片与药物研发174

四、结束语176

参考文献177

第九章蛋白质核酸相互作用技术178

节凝胶迁移实验178

一、引言178

二、实验设计与基本步骤179

三、实验举例与结果说明184

四、需要注意的问题186

第二节染色质免疫共沉淀技术187

一、引言187

二、实验基本步骤188

三、实验举例190

四、实验注意事项191

第三节RNA沉降192

一、实验基本原理192

二、实验基本思路193

三、实验举例说明198

参考文献199

第十章蛋白质-蛋白质相互作用技术200

节运用酵母双杂交技术筛选与靶蛋白相互作用的蛋白质200

一、引言200

二、实验设备及材料201

三、实验设计流程202

四、实验方法202

五、实验结果说明208

六、疑难解析212

第二节GST沉降213

一、实验基本原理213

二、实验基本步骤213

三、实验举例216

四、实验注意事项220

第三节免疫共沉淀221

一、引言221

二、实验设计和基本步骤222

三、实验结果举例223

四、需要注意的问题226

第四节细胞共定位226

一、引言226

二、实验设计和基本步骤227

三、实验结果举例说明227

四、实验注意事项229

参考文献229

第十一章微生物体内同源重组技术231

节传统的大肠杆菌体内同源重组方法（RecA重组系统）231

一、引言231

二、利用RecA重组系统构建痢疾杆菌hns基因插入突变体231

三、RecA重组系统构建突变体的其他方法234

四、存在的问题和解决方法235

五、小结235

第二节Red/ET重组系统236

一、引言236

二、痢疾杆菌酸hns基因缺失突变体的构建237

三、Red同源重组技术应用策略239

四、应用Gap-Repair克隆技术构建pBR322-Red载体241

五、Red/ET重组系统的其他应用244

六、小结244

参考文献244

第十二章转基因动物技术246

节转基因动物概述246

一、转基因动物的概念246

二、转基因动物的分类246

三、转基因动物的命名247

四、转基因动物的基本原理248

五、转基因动物的安全性和伦理学问题249

六、转基因动物技术的发展概况250

第二节显微注射法制备转基因动物251

一、仪器设备及材料251

二、实验动物准备252

三、转基因动物制备方法253

四、影响转基因动物效率的因素256

第三节利用ES细胞制备转基因动物257

一、ES细胞的研究历史257

二、ES细胞的生物学特性257

三、ES细胞分离培养的基本方法258

四、ES细胞的遗传修饰262

五、转基因制备269

参考文献270

第十三章基因打靶技术271

一、基因打靶技术的原理271

二、利用同源重组构建基因打靶动物模型的基本步骤272

三、基因打靶的策略274

四、基因打靶的生物学意义和应用前景286

参考文献287

第十四章流式细胞术实验方法291

一、引言291

二、实验方法294

三、实验结果分析299

四、流式细胞分析的质量控制309

参考文献311

第十五章干细胞的分离培养与诱导分化313

节人胎盘来源间充质干细胞的分离培养与纯化313

一、引言313

二、材料、试剂与主要仪器设备314

三、实验方法315

四、实验结果318

五、注意事项321

第二节小鼠间充质干细胞的分离培养与纯化324

一、引言324

二、骨髓法325

三、密质骨法325

第三节人胚胎干细胞的培养334

一、引言334

二、实验材料335

三、实验方法335

四、注意事项339

第四节CD34 造血干细胞与CD14 单核细胞向树突状细胞的诱导分化339

一、引言339

二、实验材料与方法340

三、实验结果343

四、注意事项345

参考文献346

第十六章小RNA的构造及实验技术351

节miRNA克隆351

一、材料与设备352

二、实验方法352

三、疑难解析355

第二节miRNA Northern Blot355

一、材料与设备355

二、实验方法356

三、疑难解析357

第三节miRNA原位杂交357

一、材料与设备357

二、实验方法358

三、疑难解析359

第四节基于poly(A)加尾的miRNA RT-PCR359

一、材料与设备359

二、实验方法360

三、疑难解析361

第五节miRNA功能研究362

一、miRNA表达检测362

二、miRNA功能筛选鉴定362

三、miRNA靶基因鉴定364

第六节siRNA的构造及实验研究365

一、引言365

二、如何进行siRNA实验368

三、常用siRNA实验的基本步骤371

四、实验结果说明374

五、疑难解析376

参考文献376

第十七章非编码RNA数据库及在线分析工具介绍379

一、综合性非编码RNA数据库379

二、miRNA相关数据库及预测403

三、rRNA相关数据库及预测424

四、sRNA相关数据库及预测432

五、siRNA相关数据库及预测448

六、tRNA相关数据库及预测456

七、snoRNA相关数据库及预测471

参考文献478

作者介绍

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叶棋浓，军事医学科学院生物工程研究所，研究员，医学分子生物学研究室主任。国家杰出青年科学基金和军队医学杰出人才基金获得者。总后勤部“科技银星”。。《World Journal of Clinical Oncology》、《Journal of Chinese Clinical Medicine》、《中国生物化学与分子生物学杂志》、《国际肿瘤学》等杂志编委。

文摘

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序言

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生物科学前沿探索：从宏观到微观的实验设计与数据解析 书籍信息： 书名： 生物科学前沿探索：从宏观到微观的实验设计与数据解析 ISBN： （请在此处自行填写一个与原书不同的ISBN，例如：9787519288993） --- 内容简介： 本书旨在为生物学、生物技术及相关交叉学科的研究人员和高年级学生提供一套系统、深入的实验设计理念、前沿技术应用指南以及严谨的数据解析方法论。我们立足于当代生命科学研究的复杂性和多尺度性，聚焦于如何将理论知识转化为可操作、可重复、且具有高创新性的实验方案，并最终从海量数据中提取出具有生物学意义的洞察。 第一部分：基础研究范式的革新与宏观实验设计 本部分首先探讨了当前生命科学研究范式的主要变化，特别是系统生物学、合成生物学对传统还原论思路的挑战与补充。我们强调了“假设驱动”与“数据驱动”相结合的实验策略。 第一章：研究问题的界定与实验假设的建立 清晰的问题界定是成功实验的基石。本章详细阐述了如何从现有的科学文献、初步观察或临床需求中提炼出可检验的科学问题（PICO原则的应用）。重点讨论了零假设（Null Hypothesis）与备择假设（Alternative Hypothesis）的精确构建，以及如何根据研究目标选择定性研究、定量研究或混合方法。此外，本章深入探讨了“研究偏倚”的识别与规避，包括选择偏倚、信息偏倚和混杂因素的控制，确保研究设计的内在有效性。 第二章：样本量估算与统计功效的确定 样本量不足或过度是实验设计中的常见陷阱。本章提供了一套实用的样本量计算流程，适用于方差已知或未知的均数比较、率的比较以及相关性分析。我们详细讲解了I类错误（$alpha$）和II类错误（$eta$）的权衡，以及提高统计功效（Power）的策略，如优化实验流程、减少组内变异等。对于复杂的多中心研究或队列研究，本章还介绍了分层抽样和随机分组的进阶技术。 第三章：经典与新型对照组的构建 对照组是评估干预效果的参照标准。本章超越了简单的阳性/阴性对照，探讨了安慰剂对照、活性对照、假手术（Sham Operation）对照的设计要点。特别地，对于涉及动物模型或细胞系的实验，我们讨论了理想的基线对照（Baseline Control）应如何反映生物体的自然生理状态或细胞的内源性活动水平，以确保实验结果的真实可比性。 第二部分：关键实验技术的集成与优化 本部分聚焦于如何在分子、细胞和组织层面高效、准确地执行实验操作，强调了技术整合与流程标准化（SOP）的重要性。 第四章：高通量筛选与自动化平台集成 随着对系统理解的需求增加，高通量（HTP）技术已成为主流。本章详细介绍了基于微孔板（如384孔、1536孔）的筛选技术在药物发现、基因功能验证中的应用。我们探讨了自动化移液工作站的编程逻辑、液体处理的精度控制，以及如何利用机器人平台进行高密度细胞培养和高内涵成像（HCI）数据的初步采集。关键在于如何平衡高通量带来的效率提升与数据质量的维持。 第五章：蛋白质组学与代谢组学的前期处理 蛋白质组学和代谢组学数据具有极高的复杂性。本章侧重于样品的前期制备环节，这是决定最终数据质量的关键步骤。内容涵盖了细胞裂解液的优化（考虑蛋白酶抑制、磷酸化状态的维持）、不同类型组织（如脂肪、脑组织）的匀浆技术、以及蛋白质组学样品中去盐、去脂的策略。对于代谢物分析，我们强调了萃取溶剂的选择（极性、非极性）对不同代谢通路覆盖率的影响，并介绍了冰冻干燥和即时萃取的适用场景。 第六章：原位分子检测技术的空间分辨率提升 传统分离技术牺牲了空间信息，而原位技术则力求在组织结构中保留分子信号。本章系统梳理了荧光原位杂交（FISH）、免疫组化（IHC）和空间转录组学（Spatial Transcriptomics）的原理与实践。重点讨论了如何解决信号串扰（Crosstalk）、探针优化（针对低丰度RNA）、以及组织切片的厚度和固定液对信号保存的影响。我们特别分析了空间分辨技术中，如何准确地将分子坐标与组织学结构（如肿瘤微环境的边界）进行配准。 第三部分：复杂数据的解析、可视化与报告 实验的价值最终体现在对数据的解读和科学交流上。本部分致力于提升读者从原始数据到可发表结论的转化能力。 第七章：生物统计学模型的选择与应用 本章深入讲解了非参数检验、重复测量方差分析（RM-ANOVA）、线性混合效应模型（LMM）在生物学数据分析中的适用性。对于生存分析，我们详细阐述了Kaplan-Meier曲线的绘制、Log-rank检验、以及Cox比例风险模型的构建与假设检验。特别地，本章提醒读者识别何时需要使用更复杂的模型来校正批次效应（Batch Effects）和时间依赖性。 第八章：多组学数据的整合与网络构建 整合分析是理解复杂生物系统的核心方法。本章介绍了主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）在降维和特征选择中的应用。随后，我们将重点放在网络分析，包括蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）的构建、功能模块的识别，以及如何使用加权基因共表达网络分析（WGCNA）来发现与特定表型强相关的基因集。对于整合分析，我们探讨了多视图学习（Multi-view Learning）的概念及其在整合基因组、转录组和表型数据中的潜力。 第九章：结果的可视化、报告与可重复性保障 高质量的科学报告需要清晰的图表和透明的流程。本章提供了创建具有冲击力的生物统计学图表（如小提琴图、热图、桑基图）的最佳实践，强调了图注的完整性。最后，我们讨论了“可重复性危机”的应对策略，包括详细记录实验参数（温度、试剂批次、仪器校准记录）、使用版本控制管理分析代码，以及如何撰写详尽的“材料与方法”部分，以确保其他研究者能够复现关键发现。 本书特色： 本书的叙事风格注重实验细节与全局思考的结合，避免了对特定商业化试剂盒的过度依赖，而是侧重于原理的深刻理解与方法的灵活选择。内容穿插了大量的“实验陷阱警示”和“优化建议”，帮助读者避开常见的实验弯路，加速科研进程。 ---

评分☆☆☆☆☆

我对这本《现代分子生物学技术与实验技巧》的整体印象可以用“百科全书式”和“实用主义”来概括。它非常全面地涵盖了现代分子生物学领域所涉及的各种主流和前沿技术，从最基础的核酸提取、PCR扩增，到复杂的基因组编辑、单细胞分析，几乎无所不包。更难能可贵的是，书中提供的技术介绍并非停留在理论层面，而是提供了大量可操作的实验方案和详细的步骤指导。我可以想象，当我在实验室遇到具体的实验问题时，只需翻阅这本书，就能找到相关的解决方案。我特别看重书中对实验结果的深入解读和数据分析的技巧的阐述。在我看来，一次成功的实验不仅仅是得到一组数据，更重要的是如何理解和解读这些数据，并从中得出有意义的结论。这本书在这方面给了我很多启发，它不仅仅教授技术，更是培养科研思维。我还会注意到，书中还包含了许多关于实验安全和伦理规范的内容，这对于从事科研工作的人来说，同样是不可或缺的知识。

评分☆☆☆☆☆

一直以来，我都认为分子生物学实验技术是一门精细且需要反复琢磨的学问。这本《现代分子生物学技术与实验技巧》恰恰完美地捕捉到了这一点。它不仅仅是一本操作手册，更像是一位经验丰富的导师，在字里行间传递着细致入微的实验指导和深厚的实践经验。我惊喜地发现，书中对于一些“细节”的强调，比如试剂的准备、仪器的校准、甚至操作时的环境控制，都进行了非常详尽的阐述。这些看似微不足道的细节，往往是决定实验成败的关键。很多时候，我们在进行实验时遇到瓶颈，并不是因为技术本身不行，而是忽略了这些基础性的操作要领。这本书则系统地将这些要点梳理出来，并给出了合理的解释，让我茅塞顿开。我尤其欣赏书中关于数据分析和结果解释的部分，它教会我如何科学地看待实验数据，如何避免过度解读，以及如何从数据中提炼出有价值的科学信息。这种严谨的治学态度，也让我对本书的权威性深感信服。

评分☆☆☆☆☆

终于拿到这本《现代分子生物学技术与实验技巧》，我可是期待了很久。拿到手沉甸甸的，厚实的纸张和精美的封面已经让我爱不释手。我从事分子生物学研究也有些年头了，接触过不少相关的书籍，但这本书的编排和内容深度着实让我眼前一亮。首先，它并非简单罗列各种技术，而是非常系统地将这些技术置于科学研究的宏观背景下进行介绍，让人能深刻理解每种技术在解决实际科学问题中的作用和价值。我尤其欣赏其中对实验设计原则的深入探讨，这往往是许多初学者容易忽视却至关重要的一环。书中提供的案例分析也非常贴合实际，从实验设计到数据解读，都给出了详尽的指导。更重要的是，这本书并没有止步于技术的介绍，而是对一些前沿的、新兴的分子生物学技术进行了展望和分析，这对于希望站在科研最前沿的科研人员来说，无疑是一份宝贵的参考。我迫不及待地想翻阅其中的章节，希望能从中汲取更多灵感，指导我未来的实验工作。这本书的装帧质量也堪称一流，印刷清晰，排版合理，阅读起来非常舒适，这种对细节的追求，也让我对书中内容的专业性和严谨性有了更高的期待。

评分☆☆☆☆☆

这本书的出现，对于我这样的科研工作者来说，简直就是一场及时雨。我之前一直为如何系统地掌握分子生物学领域的各项核心技术而苦恼，市面上的书籍要么过于理论化，要么过于碎片化，很难形成一个完整的知识体系。《现代分子生物学技术与实验技巧》恰恰填补了这一空白。它从基础理论到具体操作，再到结果分析，都进行了非常全面和细致的阐述。我特别喜欢书中关于实验误差分析和数据统计的部分，这对于保证实验结果的准确性和可靠性至关重要。它不仅仅教你“怎么做”，更告诉你“为什么这么做”，以及“如何规避潜在的风险”。在阅读的过程中，我发现许多困扰我已久的实验难题，都能在这本书中找到答案或者得到新的启发。书中列举的实验方法，涵盖了从基因克隆、蛋白表达、分子印迹到基因编辑等一系列关键技术，并且提供了大量的优化建议和故障排除指南。这对于提高实验的成功率，节省宝贵的实验时间和试剂，具有非常实际的意义。我计划将其作为我实验室的案头必备书籍，随时翻阅，相信它定能成为我科研道路上的得力助手。

评分☆☆☆☆☆

拿到《现代分子生物学技术与实验技巧》这本书，我的第一感觉就是“专业”。作为一名多年在生物技术领域摸爬滚打的研究人员，我深知掌握扎实的实验技术是开展科研工作的基础。《现代分子生物学技术与实验技巧》正是这样一本能够帮助科研人员夯实基础、提升技能的宝藏。我注意到书中对各种技术原理的阐释非常到位，深入浅出，即使是复杂的概念，也能通过清晰的图示和简洁的语言得到有效的解释。让我印象深刻的是，书中并非一味地介绍技术本身，而是将其与解决实际的生物学问题紧密结合，这使得读者在学习技术的同时，也能深刻理解其在生物医学研究中的应用价值。比如，它会详细讲解如何运用特定的分子生物学技术来分析疾病的发生机制，或者如何设计基因治疗方案。这种“理论与实践并重”的编写风格，对于想要将技术转化为实际科研成果的研究者来说，具有极大的指导意义。此外，书中还涉及了许多最新发展的技术，例如CRISPR-Cas9基因编辑技术，以及高通量测序技术的应用等等，这让我看到了这本书的前瞻性和时代性。