精编分子生物学实验指南(第5版上下)生命科学实验指南系列 大肠杆菌质粒和噬菌体DNA的制 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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• 大肠杆菌
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出版社： 科学出版社

ISBN：9787030203366

商品编码：29588810228

出版时间：2008-05-01

商品参数

精编分子生物学实验指南(第5版上下)生命科学实验指南系列
	定价	398.00
	出版社	科学出版社
	版次	1
	出版时间	2008年05月
	开本	16开
	作者	(美)F.M.奥斯伯//R.布伦特//R.E.金斯顿//D.D.穆尔//J.G.塞德曼等|译者:金由辛//包慧中//赵丽云
	装帧
	页数
	字数
	ISBN编码	9787030203366

内容介绍

F.M.奥斯伯、R.布伦特、R.E.金斯顿、D.D.穆尔 、J.G.塞德曼等主编的《精编分子生物学实验指南( 第5版上下)》是zhiming度很高、不断*新的《Current Protocols in Molecular Biology》系列的精编版 本。新版对原有内容进行了修订和*新，包括：大肠 杆菌、质粒和噬菌体，DNA的制备和分析，DNA和RNA 的酶学操作，RNA的制备和分析，重组DNA文库的构建 ，重组DNA文库的筛选，DNA序列测定，克隆化DNA的 诱变，DNA导入哺乳动物细胞，蛋白质分析，免疫学 ，DNA-蛋白质相互作用，酿酒酵母，原位杂交和免疫 组织化学，聚合酶链反应，蛋白质的表达，蛋白质磷 酸化的分析，生物信息学，蛋白质相互作用的分析等 ；又新增了染色质的装配与分析，核酸阵列，组合文 库的建立和使用，单个细胞或一群细胞间差异表达基 因的发现和分析四章内容。 
     本书可供高等院校和科研机构从事分子生物学研 究的科研工作者和研究生参考。

目录

译者序 
前言 
**章 大肠杆菌、质粒和噬菌体 
1.1 培养基的制备及细菌学工具 
1.1.1 极限培养基 
1.1.2 丰富培养基 
1.1.3 固体培养基 
1.1.4 实验工具 
1.2 在液体培养基中培养 
1.2.1 基本方案1 过夜培养 
1.2.2 基本方案2 大体积培养 
1.2.3 基本方案3 利用计数板监测生长情况 
1.2.4 基本方案4 利用分光光度计监测生长情况 
1.3 固体培养基上培养 
1.3.1 基本方案1 通过连续稀释法滴定和分离细菌菌落 
1.3.2 基本方案2 通过平板划线法分离单菌落 
1.3.3 基本方案3 通过铺平板分离单个菌落 
1.3.4 基本方案4 影印平板 
1.3.5 辅助方案菌株的保存和复苏 
1.4 经典细菌遗传学选论 
1.5 质粒载体 
质粒载体的选择 
1.6 质粒DNA的小量制备 
1.6.1 基本方案1 碱裂解小量制备 
1.6.2 备选方案 96孔微量滴定板碱裂解法 
1.6.3 基本方案2 煮沸小量制备法 
1.7 质粒DNA的大量制备 
1.7.1 基本方案1 碱裂解法制备粗制裂解物 
1.7.2 基本方案2 氯化铯/溴化乙锭平衡离心法 
1.7.3 备择方案 利用阴离子交换层析或分子筛层析纯化质粒DNA 
1.8 将质粒DNA导入细菌细胞 
1.8.1 基本方案1 CaCl2转化法 
1.8.2 备择方案 一步法制备和转化感受态细菌 
1.8.3 基本方案2 高效率的电转化方法 
1.9 入噬菌体概述 
1.9.1 裂解性生长 
1.9.2 溶源性生长 
1.10 作为克隆载体的入噬菌体 
1.10.1 用入噬菌体的优点 
1.10.2 选择插入的DNA 
1.10.3 入噬菌体来源的克隆载体的图谱 
1.11 入噬菌体铺平板产生噬斑 
1.11.1 基本方案1 通过连续稀释法分离单个噬斑 
1.11.2 基本方案2 噬菌体转染和体外包装构建 
1.12 培养入衍生的噬菌体载体 
1.12.1 基本方案 通过平板裂解制备噬菌体库 
1.12.2 备择方案 制备液体裂解物 
1.13 从噬菌体裂解液中制备入DNA 
基本方案 通过分级平衡梯度离心制备DNA 
1.14 源于丝状噬菌体的载体 
1.15 利用M13噬菌体衍生载体制备单链DNA 
基本方案 利用辅助噬菌体从质粒制备单链DNA 
第2章 DNA的制备和分析 
电泳及其应用 
凝胶和电路 
2.1 水溶液中DNA的纯化和浓缩 
2.1.1 基本方案 DNA的酚抽提和乙醇沉淀 
2.1.2 备择方案1 异丙醇沉淀DNA 
2.1.3 辅助方案1 丁醇浓缩DNA 
2.1.4 辅助方案2 醚抽提法去除残存酚、氯仿或丁醇 
2.1.5 备择方案2 硅膜离心柱法纯化DNA 
2.1.6 备择方案3 RNA及DNA稀溶液的纯化和浓缩 
2.1.7 备择方案4 乙醇沉淀法去除低分子质量的寡核苷酸和核苷三磷酸 
2.2 阴离子交换色谱法纯化DNA 
基本方案 
2.3 从哺乳动物组织中制备基因组DNA 
基本方案 
2.4 从植物组织中制备基因组DNA 
2.4.1 基本方案 氯化铯离心法制备植物DNA 
2.4.2 备择方案 CTAB制备植物DNA 
2.5 从细菌中制备基因组DNA 
2.5.1 基本方案 细菌基因组DNA的小量制备 
2.5.2 备择方案 氯化铯法大规模制备细菌基因组DNA 
…… 
第3章 DNA和RNA的酶学操作 
第4章 RNA的制备和分析 
第5章 重组DNA文库的构建 
第6章 重组DNA文库的筛选 
第7章 DNA序列测定 
第8章 克隆化DNA的诱变 
第9章 DNA导入哺乳动物细胞 
**0章 蛋白质分析 
**1章 免疫学 
**2章 DNA-蛋白质相互作用 
**3章 酿酒酵母 
**4章 原位杂交和免疫组织化学 
**5章 聚合酶链反应（PCR） 
**6章 蛋白质的表达 
**7章 蛋白质磷酸化的分析 
**8章 生物信息学 
**9章 蛋白质相互作用的分析 
第20章 染色质的装配与分析 
第21章 核酸阵列 
第22章 组合文库的建立和使用 
第23章 单个细胞或一群细胞间差异表达基因的发现和分析 
附录 
索引 

......

揭秘生命蓝图：深入探索微生物遗传物质的奥秘 本书是一部精选的生命科学实验指南，旨在为广大学子、科研人员以及对微生物遗传物质转化与操纵充满好奇的爱好者们，提供一套详实、系统且极具操作性的实验方法。我们聚焦于两种在分子生物学研究中扮演着至关重要角色的微小但强大的遗传载体——大肠杆菌质粒和噬菌体DNA，带领读者一步步揭开它们在生命活动中所承担的使命，并掌握在实验室中高效提取、鉴定与利用它们的核心技术。 第一部分：质粒DNA的提取与鉴定——微观世界的“生命指令” 质粒，这些独立于细菌染色体之外的小型环状DNA分子，是大肠杆菌等细菌细胞中普遍存在的遗传物质。它们不仅携带了细菌生存所必需的基因，更重要的是，常常承载着对环境变化至关重要的“附加”基因，例如抗生素抗性基因、代谢相关酶基因等。在分子生物学研究中，质粒因其易于复制、易于修饰且可作为外源基因导入的特性，成为了基因克隆、基因表达、基因治疗等领域不可或缺的工具。 本部分实验指南将从基础出发，详细阐述大肠杆菌质粒DNA的提取过程。我们将首先探讨不同提取方法的原理，包括碱裂解法、SDS裂解法等，并分析它们各自的优缺点以及适用的实验场景。对于初学者，我们将提供详细的操作步骤，从菌液的准备、细胞的裂解、DNA的沉淀与纯化，到最终的干燥与溶解，每一个环节都力求清晰明了，配以精美的图示，帮助读者克服实验过程中的潜在困难。 在提取过程中，选择合适的缓冲液、试剂的用量、反应时间以及离心速度等关键参数的控制，都将对最终提取的DNA产量和纯度产生直接影响。因此，本书将深入解析这些参数的意义，并提供优化建议，帮助读者在保证实验成功率的同时，最大化地获得高质量的质粒DNA。 除了基本的提取技术，对提取所得质粒DNA进行鉴定也是至关重要的一环。本书将介绍多种鉴定方法，帮助读者评估DNA的浓度、纯度以及是否存在降解。我们将详细讲解分光光度计在测量DNA吸光度方面的应用，以评估DNA的浓度和A260/A280比值，并以此判断DNA中蛋白质的污染程度。同时，核酸凝胶电泳作为一种分离和鉴定DNA片段的经典技术，在本部分实验中将得到详尽的阐述。我们将指导读者如何制备合适浓度的琼脂糖凝胶，如何配制电泳缓冲液，如何加载DNA样品，以及如何通过电压、时间等条件控制电泳分离效果。通过电泳条带的迁移距离和亮度，读者将能够初步判断DNA的分子量大小，是否存在RNA污染，以及DNA的完整性。 此外，对于需要进一步验证质粒DNA特性的研究，本书还将介绍限制性内切酶酶切分析。我们将讲解不同限制性内切酶的识别序列和切割位点，并指导读者如何根据质粒的已知信息设计酶切方案，通过酶切后的DNA片段在凝胶电泳上的分离情况，来验证质粒的结构，确认插入片段的存在与否，以及插入片段的方向等。这些鉴定技术将为后续的基因操作奠定坚实的基础。 第二部分：噬菌体DNA的制备与鉴定——病毒世界的基因密码 噬菌体，顾名思义，是专门感染细菌的病毒。它们在细菌的生命周期中扮演着复杂的角色，既可以整合到细菌基因组中进行潜伏，也可以在细菌细胞内大量复制并最终裂解细胞释放出子代噬菌体，从而将自身的遗传信息传递给下一代细菌。噬菌体作为研究基因调控、基因重组、DNA复制以及基因治疗的天然工具，在分子生物学领域具有举足轻重的地位。 本部分实验指南将侧重于噬菌体DNA的制备与鉴定。我们将首先介绍不同类型的噬菌体及其基因组的特点，例如DNA的类型（双链、单链）、环状或线状结构等，这将有助于读者理解后续实验设计的依据。 噬菌体DNA的制备方法与质粒DNA的提取略有不同，通常需要考虑噬菌体颗粒的组装、裂解细菌后的DNA释放以及DNA的纯化。本书将详细介绍经典的噬菌体DNA提取方法，例如酚-氯仿抽提法，并对每一步操作的目的和关键点进行深入解析。我们将指导读者如何高效地获得纯净的噬菌体DNA，并讨论可能影响DNA产量和质量的因素，如噬菌体培养条件、裂解方法以及纯化试剂的选择。 制备好的噬菌体DNA，同样需要进行严格的鉴定。本书将介绍如何利用紫外分光光度计测定DNA的浓度和纯度，以及核酸凝胶电泳来评估DNA的完整性和分子量。对于某些特定的噬菌体，其基因组可能呈现出特殊的结构，例如粘性末端或环状结构，通过选择合适的酶切位点和凝胶电泳条件，读者将能够识别这些特征。 除了常规的鉴定方法，本书还将探讨噬菌体DNA的特异性鉴定技术。例如，对于具有特定基因组结构的噬菌体，可以通过设计特异性PCR引物来扩增其基因组中的特定片段，从而确认目标噬菌体的存在。同时，我们将介绍DNA变性梯度凝胶电泳（DGGE）或温度梯度凝胶电泳（TGGE）等技术，这些技术能够区分序列上微小差异的DNA片段，对于检测噬菌体基因组的变异或杂合情况具有重要意义。 实验设计与优化：精益求精的科研态度 本书不仅提供了详实的操作指南，更强调了实验设计与优化的重要性。在每一个实验环节，我们都会引导读者思考实验的目的，选择最合适的实验方法，并根据实际情况进行调整和优化。我们将分享一些提高实验成功率的技巧和经验，例如如何避免DNA污染，如何减少核酸酶的干扰，以及如何选择最佳的反应条件以获得最大的产率和最高的纯度。 安全与伦理：严谨的科研规范 在生命科学实验中，安全与伦理始终是第一位的。本书在介绍实验操作的同时，也将重点强调实验室安全规范，包括个人防护装备的使用、化学试剂的安全处理以及废弃物的妥善处置。同时，我们将提醒读者在进行涉及基因操作的实验时，务必遵守相关的法律法规和伦理准则，确保实验的科学性、安全性和合规性。 应用前景：开启分子生物学研究新篇章 通过本书的学习，读者将能够掌握大肠杆菌质粒和噬菌体DNA制备与鉴定的核心技术。这些技术不仅是分子生物学基础研究的基石，更是推动生物技术、医药研发、基因工程等领域不断前进的重要驱动力。无论是进行基因表达调控的研究，还是开发新型的基因治疗载体，亦或是从事微生物遗传多样性的探索，本书都将为你提供坚实的技术支撑和理论指导，助你在生命科学的广阔天地中，开启属于自己的精彩篇章。 本书力求内容全面、讲解深入、操作性强，旨在成为读者在分子生物学实验道路上的得力助手，为深入理解和掌握生命科学的奥秘提供一份宝贵的参考。

评分☆☆☆☆☆

作为一名对微生物遗传学充满热情的初学者，我一直渴望能够深入了解大肠杆菌中质粒和噬菌体DNA的奥秘。市面上有很多关于分子生物学的书籍，但真正能够专注于这类特定研究领域的，并且能够将原理与实践相结合的，似乎并不多见。我希望找到一本能够系统地介绍大肠杆菌质粒和噬菌体的基本结构、复制机制，以及与之相关的DNA提取、分离和分析技术的书籍。我特别希望这本书能够详细地阐述提取质粒DNA和噬菌体DNA时，针对这两种不同类型的遗传物质，在实验操作上会有哪些具体的区别和注意事项。例如，噬菌体DNA的提取是否需要特殊的裂解方式，或者是否会混入宿主菌的DNA，这些细节上的讲解对我来说至关重要。

评分☆☆☆☆☆

最近刚开始接触基因克隆，对如何高效地进行DNA片段的纯化和连接感到有些力不从心。我了解到，不同来源的DNA（比如PCR产物、酶切片段）在纯化方法上可能有所差异，而且纯度直接影响后续连接反应的效率。我一直在寻找一本能够系统性地介绍各种DNA纯化技术，并对比其优缺点的书籍。特别是关于琼脂糖凝胶电泳分离DNA后的回收方法，我希望这本书能提供详细的步骤，以及一些可能遇到的问题和解决方案。比如，如何精确地切取目标条带，如何选择合适的胶回收试剂盒，以及如何评估回收DNA的浓度和纯度。另外，对于连接反应，我也希望能有更深入的讲解，包括不同连接酶的选择、反应体系的优化，以及如何判断连接效率。

评分☆☆☆☆☆

我最近在为我的毕业论文寻找一些实验操作的细节，特别是关于分子生物学方面的内容。我一直在纠结于究竟哪种提取质粒DNA的方法最适合我目前的研究。我看到市面上有很多相关的书籍，但总觉得不够详尽，或者说，虽然原理讲得很清楚，但实际操作中会遇到的一些小细节，比如缓冲液的配比、离心速度的具体设置、以及如何判断DNA提取的质量和产量，这些信息却语焉不详。有时候，一个微小的操作失误就可能导致整个实验前功尽弃，特别是对于像我这样刚开始接触分子生物学实验的学生来说，这种不确定性真的让人很头疼。我希望找到一本能够详细到每一步骤，甚至包括一些“秘诀”和“技巧”的书籍，能够帮助我少走弯路，提高实验的成功率。当然，我也很关注如何避免污染，以及如何选择合适的试剂，这些都是影响实验结果的关键因素。

评分☆☆☆☆☆

我一直对研究原核生物的遗传物质，特别是细菌的质粒和噬菌体DNA的提取与分析很感兴趣。在我的本科实验课上，我们曾简单接触过这些内容，但感觉知识点零散，缺乏系统性。我希望能够找到一本能够深入讲解这类实验原理的书籍，而不仅仅是简单的操作步骤。例如，质粒DNA的提取，涉及到的裂解细胞、去除RNA和蛋白质、DNA沉淀与洗涤等步骤，每一步的化学原理以及可能影响结果的因素，我都想了解清楚。特别是对于不同种类的细菌，质粒的大小和拷贝数不同，可能需要调整提取方案。我非常希望能找到一本能够详细介绍这些变化的，并且能够解释为什么需要这样做的书，而不是简单地罗列出一堆操作。

评分☆☆☆☆☆

我最近在进行一项与基因编辑相关的研究，需要对质粒DNA进行高效的构建和转化。虽然我之前有过一些分子克隆的经验，但对于如何设计和合成更复杂的质粒，比如包含特定启动子、报告基因或者多拷贝复制起始点的质粒，我感到有些迷茫。我希望能够找到一本能够提供清晰指导的书籍，从质粒载体的选择，到限制性内切酶切点的设计，再到如何构建多片段连接的质粒，都能够有详细的讲解。我尤其关注如何优化转化效率，无论是经典的感受态细胞制备，还是各种电转化、化学转化方法，都希望能有更深入的探讨，包括不同转化方法的适用场景和技巧。