細胞信號轉導研究技術 pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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李俊發，賀俊崎 著

圖書標籤:

• 細胞信號轉導
• 信號通路
• 分子生物學
• 生物化學
• 研究方法
• 實驗技術
• 細胞生物學
• 生命科學
• 醫學研究
• 生物技術

齣版社： 中國協和醫科大學齣版社

ISBN：9787811360370

版次：1

商品編碼：10252315

包裝：精裝

叢書名： 生物醫學研究技術叢書

開本：16開

齣版時間：2008-08-01

用紙：膠版紙

頁數：380

正文語種：中文

編輯推薦

　　我們期望《細胞信號轉導研究技術》能夠成為適閤我國綜閤性大學和醫學院校相關專業研究生的教科書，成為我國從事生命科學、基礎或臨床醫學研究的科學工作者的參考書。

內容簡介

　　目前，生物醫學研究的發展突飛猛進，繼20世紀遺傳密碼、基因轉錄、翻譯和蛋白質修飾等基本規律的研究獲得突破之後，如何控製細胞的基因錶達、增殖、分化和發育等細胞信號轉導過程將成為本世紀生物學研究領域的最大挑戰。細胞信號轉導主要以細胞感受、轉導機體內外環境信息的分子通路、生物個體發育過程中調節基因錶達和代謝生理反應等為其主要的研究內容。它不僅涉及細胞生物學、分子生物學、生物化學、生理學和免疫學等基礎學科的研究領域，而且與臨床醫學中的一些重大疾病的發病和治療密不可分。因此，近年來細胞信號轉導的研究引起瞭國內外生命科學界的廣泛關注，有關細胞信號轉導方麵的研究論文大量地齣現在與生命科學有關的期刊中。
　　細胞信號轉導幾乎涉及細胞內所有的生理活動。獨立的生物體，如酵母和細菌，在溫度、滲透壓和營養成分發生變化時，通過閤成所需蛋白質，來提高自身在一定條件下的生存能力；有活動能力的細胞在遇到趨化因子時，嚮源頭移動；對於動物，腎上腺素加強細胞的新陳代謝，生長素促進細胞進行基因復製與分裂；生物在多變，甚至於惡劣的環境條件下，對外界刺激的反應具有驚人的適應能力。對於這些生命現象內在的分子機製，即細胞識彆刺激並把這種識彆轉變為反應的過程的瞭解，都依賴於我們對細胞信號轉導知識的積纍。

作者簡介

　　李俊發，男，博士，教授、博士生導師。現任首都醫科大學神經生物係副主任、分子生物學實驗測試室主任，兼中國生理學會理事、北京生理科學會秘書長、《生理通訊》主編、《基礎醫學與臨床》常務編委和《中華眼底病雜誌》編委等學術職務。2006年6月在首都醫科大學神經生物學專業獲理學博士學位；1996～2001年，美國國立衛生研究院（NIH）做訪問學者；2005年在美國德州大學醫學部（uTMB）做訪問研究員。從事細胞信號轉導、蛋白質化學修飾，以及腦缺血／低氧性損傷和適應形成的細胞分子機製等領域的研究工作。近5年獲得國傢、部和市級科研和人纔基金等14項課題資助，其中3項國傢自然科學基金。目前已在國內外發錶論文80餘篇，其中在J Biolchem和Proc Natl Acad Sci USA等SCI雜誌上發錶論文29篇。
　　賀俊崎，男，博士，北京市特聘教授、教育部新世紀優秀人纔、博士生導師。1998年在中國協和醫科大學獲博士學位；1998-2003年在美國Emoryuniversity學習；2003～2004年在Emory university任職。賀俊崎教授所從事的研究方嚮為細胞信號轉導與蛋白質組學，目前著重研究PDZ蛋白細胞信號轉導通路及PDZ蛋白的生物學功能。研究工作獲國傢自然基金、教育部博士點基金、北京市自然基金、北京市教委重點課題、教育部新世紀優秀人纔奬勵計劃以及北京市優秀人纔奬勵計劃等多種基金資助。多項研究成果發錶於J Biol Chem、Oncogene等多種國際著名期刊上。

內頁插圖

目錄

第一部分　細胞信號轉導基本理論
第1章　配體與受體簡述
第2章　G蛋白及其偶聯的效應酶
第3章　蛋白激酶與蛋白磷酸酶
第4章　蛋白激酶C與細胞信號轉導
第5章　蛋白結構域與細胞信號轉導
第6章　鈣離子與細胞信號轉導
第7章　受體酪氨酸激酶與細胞信號轉導
第8章　非受體蛋白酪氨酸激酶與細胞信號傳導
第9章　受體絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶與細胞信號轉導
第10章　磷脂酰肌醇3-激酶、蛋白激酶B與細胞信號轉導
第二部分　細胞信號轉導研究技術
第11章　生物樣品采集、貯存及預處理技術
第12章　蛋白質分離純化技術
第13章　聚丙烯酰胺凝膠電泳技術
第14章　蛋白質染色技術
第15章　蛋白質印跡技術
第16章　雙嚮電泳技術
第17章　蛋白質免疫沉澱技術
第18章　染色體免疫共沉澱技術
第19章　凝膠電泳遷移率變動分析技術
第20章　免疫組織化學技術
第21章　哺乳動物細胞中基因瞬時錶達技術
第22章　RT-PCR技術
第23章　RNA乾擾技術
第24章　DNA點突變及報告基因熒光素酶技術
第25章　蛋白質半衰期檢測技術
第26章　B-0連接N-乙酰葡萄糖胺糖基化位點檢測技術
第27章　蛋白質甲基化研究技術
第28章　生物質譜技術

精彩書摘

　　第1章　配體與受體簡述
　　生物體由多種具有特殊結構和功能的細胞組成，是一個復雜的有機整體。生物體對外界刺激的反應，需要通過信號轉導係統來傳遞，從而調控機體內的特定功能，以保證機體生命活動的正常進行。細胞信號轉導（signal transduction）是指細胞外信號通過與細胞錶麵或細胞內受體的結閤，引發胞內級聯反應，進而調節胞內特定蛋白酶的活性或誘導特定基因的錶達，使細胞發生應答反應的過程。生物體細胞之間信息的傳遞，除瞭可依靠直接接觸或縫隙連接外，更主要的是通過配體與受體結閤所介導的細胞信號轉導反應來實現的。作為細胞信號轉導過程中的重要組成成分，本章主要從概念、分類及功能等方麵，對配體與受體作一簡要介紹。
　　1　配體
　　配體（ligand）是生物體內能特異結閤並激活受體的小分子化閤物或多肽，也稱為第一信使，包括激素、神經遞質、細胞因子、淋巴因子、生長因子和化學誘導劑等物質。按其來源和化學性質不同可分為胺類信使、肽類激素、生長因子和脂肪酸衍生物等（錶1.1）。按其特點和作用機製，第一信使主要包括以下幾類：
　　1.1 激素
　　激素通常由遠離靶器官的內分泌細胞分泌，隨血液循環運輸到生物體各部位而發揮作用。一旦進入血液循環，它們被大量稀釋或被相應的酶降解。在循環中，它們大多與特異的結閤蛋白形成復閤物。靶細胞周圍的激素濃度十分低，所以細胞的受體必須對激素有很高的親和力。盡管一個靶細胞可以在幾毫秒之內與激素相結閤，但總的反應時間跨度在幾秒到幾小時不等。按激素的化學組成可分為含氮激素、類固醇激素和脂肪酸衍生物等。

前言/序言

　　信號轉導原本為物理學專用名詞，1977年Hildebrand第一次使用該術語，用於描述生物體細胞外信號通過與細胞錶麵的受體相互作用，轉變為胞內信號並在細胞內傳遞的過程。隨後“信號轉導”被Springer、Koman和Kenny等人相繼使用。然而，直到1980年，Martin Rodbell在《Nature》雜誌上發錶一篇有關“信號轉導”的綜述後，該術語纔被廣泛地應用於生物學研究領域。同時，Martin Rodbell本人也由於開創瞭細胞信號轉導這一嶄新的研究領域，於1994年和Alfred G Gilman共同獲得瞭諾貝爾醫學或生理學奬。
　　目前，生物醫學研究的發展突飛猛進，繼20世紀遺傳密碼、基因轉錄、翻譯和蛋白質修飾等基本規律的研究獲得突破之後，如何控製細胞的基因錶達、增殖、分化和發育等細胞信號轉導過程將成為本世紀生物學研究領域的最大挑戰。細胞信號轉導主要以細胞感受、轉導機體內外環境信息的分子通路、生物個體發育過程中調節基因錶達和代謝生理反應等為其主要的研究內容。它不僅涉及細胞生物學、分子生物學、生物化學、生理學和免疫學等基礎學科的研究領域，而且與臨床醫學中的一些重大疾病的發病和治療密不可分。因此，近年來細胞信號轉導的研究引起瞭國內外生命科學界的廣泛關注，有關細胞信號轉導方麵的研究論文大量地齣現在與生命科學有關的期刊中。
　　細胞信號轉導幾乎涉及細胞內所有的生理活動。獨立的生物體，如酵母和細菌，在溫度、滲透壓和營養成分發生變化時，通過閤成所需蛋白質，來提高自身在一定條件下的生存能力；有活動能力的細胞在遇到趨化因子時，嚮源頭移動；對於動物，腎上腺素加強細胞的新陳代謝，生長素促進細胞進行基因復製與分裂；生物在多變，甚至於惡劣的環境條件下，對外界刺激的反應具有驚人的適應能力。對於這些生命現象內在的分子機製，即細胞識彆刺激並把這種識彆轉變為反應的過程的瞭解，都依賴於我們對細胞信號轉導知識的積纍。

細胞信號轉導研究技術：一部跨學科的深度探索 本書聚焦於分子生物學、生物化學和細胞生物學的前沿交叉領域，旨在為生命科學研究者提供一套全麵、深入且極具操作性的技術指南。它並非探討細胞信號轉導的理論模型，而是聚焦於如何實現、檢測和量化這些復雜過程的實驗方法學。 全書結構嚴謹，內容覆蓋瞭從基礎的分子工具構建到高通量、動態成像分析的各個層麵，力求構建一個完整的、可操作的實驗技術知識體係。 --- 第一部分：基礎分子工具與蛋白質檢測技術 本部分是理解和操縱信號通路的基礎，重點在於如何精確地識彆和量化通路中的關鍵參與者。 1. 蛋白質的提取、純化與定量 章節詳細闡述瞭細胞和組織裂解液的配製策略，區分瞭溫和裂解（用於保留蛋白間相互作用）與強力裂解（用於提取膜蛋白或核蛋白）的技術要點。重點講解瞭不同類型色譜技術（離子交換、疏水作用、親和層析）在目標蛋白純化中的應用，包括如何選擇閤適的樹脂和洗脫梯度以達到高純度。此外，還深入討論瞭基於Bradford、BCA和熒光法的蛋白質濃度測定方法的優缺點及其在不同背景下的適用性。 2. 免疫化學檢測的精細化操作 本部分是信號轉導研究的基石。Western Blotting (WB) 的內容遠超標準流程，它細緻分析瞭電泳條件（SDS-PAGE、非變性膠）對特定蛋白亞型和復閤物分離的影響。在抗體選擇上，強調瞭單剋隆與多剋隆抗體的適用場景，以及二抗的交叉反應性控製。針對磷酸化蛋白的檢測，詳細介紹瞭抗體孵育的優化策略，包括變性條件、去磷酸化的預防措施以及如何利用磷酸酶抑製劑組閤精確反映細胞的瞬時狀態。 免疫沉澱 (IP) 和共免疫沉澱 (Co-IP) 的章節是本書的亮點之一。它不僅涵蓋瞭基礎的蛋白質相互作用驗證，還引入瞭“Pull-Down”實驗（如GST/His-tag Pull-Down），用於體外篩選和驗證直接的物理接觸。針對Co-IP中常見的非特異性背景問題，本書提供瞭使用“洗滌緩衝液滲透性梯度”的精細化洗滌方案，以區分弱結閤與強結閤的相互作用。 3. 酶聯免疫吸附測定（ELISA）的應用與優化 本部分側重於可定量檢測細胞因子、內源性信號分子（如cAMP, IP3）的構建。詳細對比瞭間接ELISA、夾心ELISA和競爭性ELISA在不同分析物濃度範圍內的靈敏度和特異性。特彆探討瞭高通量篩選（HTS）中Plate Reader（酶標儀）的參數設置，包括光路校準和背景扣除的標準化流程。 --- 第二部分：基因工程與信號分子調控 本部分關注如何通過遺傳操作手段，精確地“擾動”信號通路，以探究特定組分的因果關係。 4. 瞬時轉染與穩定細胞係的構建 對於信號轉導研究而言，準確錶達外源基因至關重要。本書詳細對比瞭脂質體法、電穿孔法和病毒載體法的效率與對細胞活力的影響。在穩定細胞係構建中，重點討論瞭篩選標記的選擇（如嘌呤黴素、G418抗性）以及如何通過剋隆選擇來排除低錶達或非特異性整閤的細胞株，確保後續實驗結果的可重復性。 5. 報告基因係統在通路激活檢測中的應用 本書深入介紹瞭如何利用報告基因係統（如Luciferase, GFP）來監測特定的轉錄因子活性或通路事件。針對NF-$kappa$B、CREB或AP-1等通路，詳細說明瞭如何設計包含特定順式作用元件的報告質粒。討論瞭雙熒光素酶報告係統在標準化轉染效率中的關鍵作用，並提供瞭用於校準和數據歸一化的具體算法。 6. 基因沉默技術：siRNA/shRNA 的設計與驗證 本部分聚焦於“敲低”技術的精確性。在siRNA設計方麵，不僅僅停留在軟件推薦序列，而是深入分析瞭脫靶效應的預測方法，以及如何通過設計多個獨立靶嚮序列的“雞尾酒”組閤來增強特異性。對於shRNA，強調瞭其在慢病毒包裝後的滴度測定和轉導效率評估，確保在穩定細胞係中實現持續的、高效的基因錶達下調。 --- 第三部分：動態成像與時空分辨率分析 傳統的終點檢測方法難以捕捉信號轉導的動態變化。本部分旨在提供在時間和空間維度上解析信號流動的先進技術。 7. 熒光蛋白的生物學應用與優化 本章詳細剖析瞭FRET (Förster共振能量轉移) 技術在檢測蛋白質-蛋白質近距離相互作用（<10 nm）中的應用，包括雙嚮 FRET 策略用於區分磷酸化依賴性和非依賴性結閤。此外，對於BRET (生物發光共振能量轉移)，探討瞭其在活細胞和體內研究中的優勢，以及如何選擇閤適的底物（如熒光素衍生物）以最小化光毒性。 8. 活細胞成像與高內涵篩選 (HCS) 本書側重於延時攝影（Time-Lapse Imaging） 的實驗設計，特彆是針對細胞遷移、內吞或胞吐等涉及信號重塑的過程。詳細介紹瞭用於構建活細胞成像緩衝液的配方，以及如何控製環境參數（溫度、CO2濃度）的穩定性。在高內涵篩選部分，重點講解瞭如何利用自動化顯微鏡平颱進行多參數（形態、核染色、蛋白定位）的定量分析，以及圖像去噪和特徵提取的生物信息學流程。 9. 膜電位與離子流動的測量技術 針對涉及離子通道和G蛋白偶聯受體（GPCRs）的信號通路，本部分介紹瞭膜片鉗技術（Patch-Clamp） 的基礎操作流程（從形成吉爾鬆-瓦茨連接到內嚮記錄模式）。同時，對於更側重於群體效應的檢測，詳細闡述瞭熒光鈣指示劑（如Fura-2, Fluo-4） 的使用方法，包括其最佳激發/發射波長、細胞內預加載的優化以及如何進行熒光比率成像以消除背景乾擾。 --- 第四部分：係統生物學與定量分析方法 本部分超越瞭單個組分的分析，轉嚮對整個信號網絡的理解。 10. 磷酸化蛋白質組學的前處理與質譜分析準備 針對高通量地識彆磷酸化位點，本章詳述瞭蛋白質組學樣本製備的關鍵步驟：如何通過金屬離子親和層析（如TiO2或IMAC）對磷酸化肽段進行富集，以應對磷酸化信號的低豐度問題。隨後，對酶解策略（胰酶/賴氨酸酶的選擇）和肽段純化技術進行瞭深入比較。 11. 生物信息學工具在信號通路解析中的應用 本部分指導研究者如何處理和解釋復雜的實驗數據。內容包括：如何使用網絡分析工具（如Cytoscape） 來可視化和注釋相互作用數據；如何利用統計學模型（如T檢驗、ANOVA）對多組彆間的信號強度差異進行可靠性評估；以及如何結閤時間序列數據進行簡單動力學模型的擬閤，以估算信號轉導的半衰期和反應速率。 通過這四大模塊的係統性覆蓋，本書旨在為實驗室提供一套從概念提齣到數據驗證的完整技術框架，確保研究人員能夠以最高的標準和效率，深入解析細胞內錯綜復雜的信號轉導機製。

評分☆☆☆☆☆

作為一名剛剛接觸細胞生物學領域的研究助理，我曾幾何時被浩瀚的文獻和紛繁復雜的概念弄得暈頭轉嚮，尤其是在麵對“信號轉導”這個既熟悉又陌生的詞匯時。慶幸的是，《細胞信號轉導研究技術》恰好填補瞭我知識體係中的這一重要空白。它並非一本充斥著理論推導的枯燥教材，而是以一種非常友好的方式，將那些抽象的分子事件具象化。我非常喜歡書中通過大量精美的細胞圖像和清晰的機製圖來解釋復雜的信號通路。例如，在介紹G蛋白偶聯受體（GPCR）信號轉導時，書中不僅列齣瞭參與其中的關鍵蛋白，還配以動態的示意圖，生動地展示瞭配體結閤、受體激活、G蛋白解離再結閤以及下遊效應激活的完整過程。這比我之前閱讀的任何文獻都更能幫助我建立起對整個通路的直觀理解。此外，書中還非常細緻地介紹瞭各種檢測通路激活狀態的實驗方法，包括Western Blot、ELISA以及各種激酶活性檢測方法，並針對每種方法提供瞭詳細的操作步驟和注意事項。最讓我印象深刻的是，書中並沒有止步於技術的介紹，而是進一步探討瞭如何根據不同的研究問題選擇最閤適的技術，以及如何將多種技術結閤起來，從不同的維度驗證信號通路的激活和調控。這種“授人以魚不如授人以漁”的教學理念，讓我受益匪淺。

評分☆☆☆☆☆

作為一名博士後研究員，我的研究方嚮與細胞信號轉導密切相關，因此我一直在尋找一本能夠係統性梳理該領域研究技術，並且能夠提供實用指導的參考書。《細胞信號轉導研究技術》這本書的齣現，可以說大大減輕瞭我撰寫科研項目申請書以及設計實驗方案時的壓力。書中對不同信號通路的研究策略進行瞭清晰的分類和闡述，例如，針對激酶信號通路、G蛋白偶聯受體信號通路、鈣信號通路等，都分彆介紹瞭其核心的調控機製和常用的研究技術。我特彆欣賞書中關於“技術選擇與優化”部分的詳細論述，它不僅僅是羅列技術名稱，而是深入分析瞭每種技術在特定情況下的優缺點，以及如何根據研究目標、樣本類型和可用資源來做齣最佳選擇。書中提供的實驗設計思路和案例分析，對我來說是寶貴的財富。例如，在研究某個新發現的信號分子時，書中提供瞭一係列循序漸進的驗證步驟，從初步的基因錶達分析，到蛋白質互作研究，再到功能性實驗驗證，思路清晰，邏輯嚴謹。此外，書中還對數據分析和結果解讀提齣瞭不少獨到的見解，幫助我避免瞭一些常見的誤區。這本書無疑成為瞭我實驗室案頭必備的參考書之一。

評分☆☆☆☆☆

我是一名畢業多年的實驗室技術人員，多年來一直從事著基礎的生物樣本處理和常規的生化檢測工作。雖然工作穩定，但我內心始終對更深層次的細胞功能調控機製充滿著好奇，尤其是當我的日常工作中偶爾會接觸到一些關於細胞信號轉導的實驗數據時。這次偶然的機會，我讀到瞭《細胞信號轉導研究技術》，這本書給我帶來瞭極大的啓發，它讓我看到瞭一個更廣闊的研究世界。書中對於各種先進技術的介紹，雖然有些我目前還無法直接操作，但其原理的闡述以及在科研中的應用前景，都讓我大開眼界。例如，書中關於活細胞成像技術和單分子追蹤的章節，描述瞭如何在動態過程中觀察細胞內的信號分子行為，這簡直是以前想都不敢想的。它讓我意識到，我們對細胞信號轉導的理解，已經從靜態的“快照”走嚮瞭動態的“電影”。書中還詳細講解瞭如何利用基因工程手段來構建實驗模型，例如過錶達或敲低特定信號分子，以及如何利用熒光蛋白標記來追蹤信號分子的定位和動態變化，這些都為我打開瞭新的思路。雖然我可能不會立即進行相關的實驗，但這本書極大地拓展瞭我對細胞信號轉導研究的認知邊界，讓我對未來可能參與的研究項目充滿瞭期待。

評分☆☆☆☆☆

這本書的齣現，簡直是為我這樣對生命科學領域，尤其是細胞層麵的奧秘充滿好奇的研究者們打開瞭一扇新的大門。我一直深陷於傳統實驗方法的束縛，那些繁瑣的步驟和漫長的等待，總讓我覺得前進的速度趕不上知識更新的步伐。當我在書架上翻閱到《細胞信號轉導研究技術》時，一種強烈的預感告訴我，這可能是我一直在尋找的答案。迫不及待地翻開，我首先被書中對各種前沿技術的詳細闡述所吸引。從基礎的免疫熒光標記，到復雜的流式細胞術，再到近年來越來越受到關注的CRISPR技術在信號通路調控中的應用，書中都進行瞭深入淺齣的講解。不僅僅是原理的介紹，作者更是以一種實踐者的視角，詳細描述瞭每種技術在實際研究中的應用案例、潛在的挑戰以及如何規避這些挑戰的實用建議。例如，在講解信號通路激活檢測時，書中提供瞭一係列優化實驗條件、選擇閤適抗體以及數據解讀的圖錶和流程圖，這對於正在開展相關研究的我來說，無疑是雪中送炭。我尤其欣賞書中對不同技術組閤使用的討論，它讓我意識到，單一技術的局限性可以通過巧妙的組閤來剋服，從而獲得更全麵、更深入的細胞信號轉導信息。這本書的價值，不僅僅在於知識的傳授，更在於它激發瞭我對更多可能性和新研究方嚮的探索欲望。

評分☆☆☆☆☆

我是一名生物學本科四年級的學生，即將麵臨畢業論文的選題和研究。在導師的指導下，我選擇瞭細胞信號轉導作為研究方嚮，但由於知識儲備不足，我時常感到迷茫。正當我為此苦惱時，我發現並閱讀瞭《細胞信號信號轉導研究技術》。這本書用非常生動形象的方式，將那些我曾經認為枯燥晦澀的生物學概念解釋得淺顯易懂。我尤其喜歡書中那些“知識鏈接”和“實驗技巧小貼士”的部分，它們像是為我量身定做的學習助手。例如，在講解細胞周期調控時，書中不僅解釋瞭細胞周期蛋白和CDK的相互作用，還巧妙地將這些知識與檢測細胞周期進展的流式細胞術聯係起來，讓我能夠理解理論與實驗的緊密結閤。書中對各種關鍵技術，例如Western Blot、PCR、免疫沉澱等，都進行瞭詳細的圖文講解，不僅有操作步驟，還有對結果的預期和異常情況的分析。這對於我這樣一個初次接觸實驗的研究者來說，極大地降低瞭學習門檻。這本書讓我對細胞信號轉導的研究充滿瞭信心，也為我的畢業論文研究提供瞭堅實的技術基礎和清晰的研究思路。我深深感激這本書為我打開瞭科學研究的大門。

評分☆☆☆☆☆

印刷質量不好，書的內容無亮點，很多感覺抄自教科書

評分☆☆☆☆☆

快遞送貨快，書也很好

評分☆☆☆☆☆

商傢還是不錯的，包裝運輸時還是比較用心的

評分☆☆☆☆☆

快遞送貨快，書也很好

評分☆☆☆☆☆

經典。

評分☆☆☆☆☆

內容還沒咋看，不妄加評價。

評分☆☆☆☆☆

印刷質量不好，書的內容無亮點，很多感覺抄自教科書

評分☆☆☆☆☆

內容寫瞭很多大傢都懂的，浪費版麵，浪費錢

評分☆☆☆☆☆

商傢還是不錯的，包裝運輸時還是比較用心的