內容簡介
《生物實驗室係列:實時熒光定量PCR》具有特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點,受到生物學傢們的青睞,促進瞭生命科學的發展。該技術是目前確定樣品中DNA或RNA拷貝數最敏感、最準確的方法,還可進行多重反應,無汙染,自動化程度高,在生物學的所有學科、醫學基礎和藥學等領域得到廣泛應用。
《生物實驗室係列:實時熒光定量PCR》在介紹實時熒光定量PCR技術原理基礎上,集中論述該技術在各個領域中的應用,包括檢測緻病菌、檢測病毒、檢測基因突變和臨床、遺傳病研究、腫瘤研究、環境微生物檢測、動物學研究、基因錶達檢測和流行病學等。在編寫時力求方法盡可能詳細,對每一種方法提供瞭反應體係、反應條件和結果分析,還附有參考文獻,但讀者在具體應用時,也不宜照本宣科,在實驗過程中應因事製宜,對實驗條件進行必要的優化。
《生物實驗室係列:實時熒光定量PCR》可供分子生物學、細胞生物學等生物學科,醫學基礎、藥學等學科高年級本科生、研究生以及其他研究人員閱讀參考。
目錄
第一章 實時熒光定量PCR概述
第一節 實時熒光定量PCR的基本原理
一、引言
二、原理
第二節 實時熒光定量PCR儀
一、Applied Biosystems公司的係列實時熒光定量PCR儀
二、iQTM 5實時熒光定量PCR儀
三、LightCycler實時熒光定量PCR儀
四、SmartCycler System實時熒光定量PCR儀
五、Mx3000P實時熒光定量PCR儀
六、Rotor�睪ene實時熒光定量PCR儀
第三節 實時熒光定量PCR中的熒光化學物質
一、熒光染料
二、水解探針
三、分子信標
四、熒光標記引物
五、雙探針雜交
六、復閤探針
第四節 實時熒光定量PCR的定量方法
一、絕對定量
二、相對定量
第五節 實時熒光定量PCR的實驗方法
一、以DNA為起始實驗材料進行實時熒光定量PCR反應
二、以RNA為起始實驗材料進行實時熒光定量RT�睵CR
第六節 實時熒光定量PCR實驗中應注意的問題
一、擴增子的設計
二、實驗方案的優化
三、實踐中應該注意的問題
小結
本章參考文獻
第二章 實時熒光定量PCR在病原菌檢測中的應用
第一節 沙門菌的檢測
一、引言
二、材料
三、方法
四、注意事項
五、應用
六、小結
本節參考文獻
第二節 在幽門螺杆菌檢測中的應用
一、引言
二、基本原理
三、試驗材料
四、方法
五、注意事項
六、應用
七、小結
本節參考文獻
第三節 在緻病性大腸杆菌檢測中的應用
一、檢測DNA樣品中fliCH7基因的Real�瞭ime PCR方法
二、檢測RNA樣品中rfbE和eae基因的Real�瞭ime PCR方法
本節參考文獻
第四節 在肉毒梭菌檢測中的應用
方案一SYBR Green Ⅰ Real�瞭ime PCR方法檢測A型肉毒梭菌
一、引言
二、原理
三、實驗目的
四、實驗材料和方法
五、實驗結果
六、討論
方案二用TaqMan Real�瞭ime PCR對A型、B型和E型肉毒梭菌的檢測
一、引言
二、原理
三、實驗目的
四、實驗材料和方法
五、實驗結果
六、討論
方案三TaqMan Real�瞭ime PCR 在肉毒梭菌C型毒素基因檢測中的應用
一、引言
二、原理
三、實驗目的
四、實驗材料和方法
五、實驗結果
六、討論
本節參考文獻
第五節 在嗜水氣單胞菌檢測中的應用
一、引言
二、材料
三、方法
四、應用
本節參考文獻
小結
第三章 實時熒光定量PCR在病毒檢測中的應用
第一節 實時熒光定量RT�睵CR在甲型H1N1檢測中的應用
一、引言
二、試驗目的
三、材料與試劑
四、試驗方法
五、結果判定
六、注意事項
七、小結
本節參考文獻
第二節 登革病毒的實時熒光定量RT�睵CR檢測
一、引言
二、試驗目的
三、材料與試劑
四、操作步驟
五、注意事項
本節參考文獻
第三節 H5N1亞型高緻病性禽流感病毒的實時熒光定量RT�睵CR檢測
一、引言
二、試驗目的
三、材料與試劑
四、操作步驟
五、試驗結果判定
六、注意事項
本節參考文獻
第四節 腸道病毒71型的實時熒光定量RT�睵CR檢測
一、引言
二、試驗目的
三、材料與試劑
四、操作步驟
五、結果分析
六、注意事項
本節參考文獻
第五節 多重實時熒光定量PCR在呼吸道病毒檢測中的應用
一、引言
二、試驗目的
三、材料與試劑
四、試驗原理與方法
五、結果判定
六、注意事項
七、小結
本節參考文獻
第六節 實時熒光定量PCR用於重組杆狀病毒滴度檢測的研究
一、引言
二、試驗目的
三、材料
四、方法
五、結果及分析
六、注意事項
七、小結
本節參考文獻
第七節 實時熒光定量PCR在HIV檢測中的應用
一、引言
二、基本原理
三、試驗材料
四、方法
五、試驗結果判定
六、注意事項
七、應用
本節參考文獻
第八節 在檢測HBV和HCV方麵的應用
A�� 實時熒光定量PCR在檢測HBV方麵的應用
一、引言
二、材料和方法
三、小結
B�筆凳庇�光定量PCR在檢測HCV方麵的應用
一、引言
二、材料和方法
三、小結
本節參考文獻
第四章 實時熒光定量PCR檢測基因突變及臨床應用
第一節 實時熒光定量PCR檢測基因突變在遺傳病診斷中的應用
一、引言
二、應用巢式PCR和TaqMan MGB探針Real�瞭ime PCR技術檢測經典型苯丙酮
尿癥(PKU)
三、應用SYBR Green Ⅰ Real�瞭ime PCR技術檢測慢性骨髓增殖性疾病
第二節 實時熒光定量PCR檢測基因突變在腫瘤診斷、治療和預後中的應用
一、引言
二、應用ASB�睵CR方法檢測Kras基因突變
第三節 實時熒光定量PCR檢測基因突變在耐藥病原體監測中的應用
一、引言
二、通過雜交探針實時熒光定量PCR檢測臨床分離的結核分枝杆菌的異煙肼抗性
三、FRET實時熒光定量PCR快速準確檢測幽門螺杆菌耐剋拉黴素相關的基因點
突變
本章參考文獻
第五章 實時熒光定量PCR在遺傳病研究中的應用
第一節 實時熒光定量PCR識彆SNP的方法
一、原理
二、常用的突變識彆方法
本節參考文獻
第二節 實時熒光定量PCR在SNP分型中的應用
一、引言
二、試驗目的
三、試驗原理
四、試驗材料
五、試驗方法
六、結果與討論
本節參考文獻
第三節 等位基因特異性實時熒光定量PCR在DNA庫中等位基因定量檢測中的
應用
一、引言
二、試驗目的
三、試驗原理
四、試驗材料
五、實驗方法
六、結果與討論
本節參考文獻
第四節 等位基因特異性PCR結閤分子信標實時熒光定量PCR在腫瘤和綫粒體疾
病檢測中的應用
一、引言
二、試驗目的
三、試驗原理
四、試驗材料
五、試驗方法
六、結果與討論
本節參考文獻
第六章 實時熒光定量PCR在腫瘤中的應用
第一節 實時熒光定量PCR在腫瘤早期診斷中的意義
方案1Pescadillo在乳腺癌組織中的錶達及其臨床意義
一、試驗目的
二、基本原理
三、實驗材料
四、實驗方法
五、實驗結果
六、小結
方案2實時熒光定量PCR檢測microRNA在不同腫瘤細胞中的錶達
一、實驗目的
二、基本原理
三、材料
四、方法
五、結果
六、小結
第二節 實時熒光定量PCR在腫瘤預後評估中的應用
方案1實時熒光定量PCR檢測uPA、PAI��1、TIMP��1 mRNA錶達與乳腺癌預
後的關係
一、實驗目的
二、實驗材料
三、實驗方法
四、實驗結果
五、小結
方案2實時熒光定量PCR檢測uPA mRNA錶達在HER2陽性乳腺癌預後中的
意義
一、實驗目的
二、實驗材料
三、實驗方法
四、實驗結果
五、小結
第三節 實時熒光定量PCR在藥物療效判斷中的作用
一、實驗目的
二、材料
三、方法
四、結果
五、小結
第四節 實時熒光定量PCR在基因錶達調控中的應用
一、實驗目的
二、實驗材料
三、實驗方法
四、實驗結果
五、小結
本章參考文獻
第七章 實時熒光定量PCR在環境微生物檢測中的應用
第一節 實時熒光定量PCR在檢測土壤微生物中的應用
一、引言
二、試驗目的
三、原理
四、土壤微生物DNA提取方法匯總
五、操作步驟
六、實時熒光定量PCR在土壤中病原菌定量檢測中的應用
七、實時熒光定量PCR在土壤中生防菌的動態變化監測中的應用
本節參考文獻
第二節 實時熒光定量PCR 技術在空氣微生物檢測中的應用
一、引言
二、試驗目的
三、試驗材料與方法
四、小結
本節參考文獻
第三節 實時熒光定量PCR在檢測水源微生物方麵的應用
一、引言
二、基本原理
三、研究進展
四、實驗方法
五、實驗結果
六、結果分析
本節參考文獻
第八章 實時熒光定量PCR在動物學研究中的應用
第一節 實時熒光定量PCR在動物感染性疾病監測和檢測中的應用
一、引言
二、原理
三、材料
四、方法與步驟
五、注意事項
六、應用
本節參考文獻
第二節 實時熒光定量PCR在轉基因動物檢測中的應用
一、引言
二、原理
三、材料
四、方法與步驟
五、注意事項
六、應用
本節參考文獻
第三節 實時熒光定量PCR在突變動物檢測和突變品係培育中的應用
一、引言
二、SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR在HLA��1502基因檢測中的應用
三、實時熒光定量PCR在白化突變鼠檢測中的應用
四、注意事項
五、應用
本節參考文獻
第四節 實時熒光定量PCR在藥物效果評價動物實驗中的應用
一、引言
二、實時熒光定量PCR在馬傳染性貧血病毒疫苗效果評價中的應用
三、利用實時熒光定量PCR評價以離子交換色譜純化抗體時外源病毒因子的清除效果
四、注意事項
五、應用
本節參考文獻
第九章 實時熒光定量PCR在基因錶達檢測和流行病學中的應用
第一節 實時熒光定量PCR在分析基因差異錶達中的應用
一、實時熒光定量PCR實驗的設計和優化
二、實時熒光定量PCR應用實例
三、實驗注意事項
四、小結
本節參考文獻
第二節 實時熒光定量PCR檢測CAR基因在小鼠肺發育不同階段中的錶達
一、引言
二、材料及方法
三、數據分析
本節參考文獻
第三節 實時熒光定量PCR在流行病學中的應用
一、微生物的檢測和鑒定
二、耐藥分析
三、DNA甲基化、單核苷酸多態性及突變分析
四、腫瘤基因檢測
五、基因錶達差異分析
六、微生態中微生物種的相對定量
本節參考文獻
前言/序言
21世紀是生命科學的世紀,這已成為人們的共識。
生命科學隨著人類對自身和自然的認識、探索而萌芽,隨著人類生産和科學實踐的進步而發展。現代生命科學包括生物學、醫學、農學等傳統學科領域,以及生物學、生物技術與環境科學乃至社會科學等其他學科相互滲透、交叉而産生的新型學科體係。20世紀後葉,現代生物科學尤其是分子生物學取得瞭一係列突破性成就,使得生命科學在自然科學體係中的位置發生瞭革命性的變化,成為21世紀的帶頭學科。人們對生命科學也寄予瞭無限的期望,希望能夠解決人類社會所麵臨的人口膨脹、資源匱乏、疾病危害、環境汙染和生態破壞等一係列重大問題。
迴顧生命科學的發展曆程,實驗技術一直起著非常重要的促進作用。如17世紀Leeuwenhoek等人發明並應用顯微鏡技術,直接催生瞭“細胞學說”的建立和發展;1973年Cohn和Boyer完成瞭DNA體外重組實驗,標誌著基因工程的肇始;1988年KaryMullis發明的PCR技術甚至使生命科學産生瞭飛躍性的發展。可以說,生命科學每時每刻離不開實驗,實驗是開啓神奇的生命王國大門的鑰匙。沒有實驗技術的不斷進步,也就沒有生命科學今天的巨大發展;同時,生命科學的發展又對實驗技術提齣瞭更高的要求,進一步刺激瞭後者的不斷進步。生命科學正是在“實驗催生和驗證著基礎理論,理論指導和發展瞭實驗技術”的不斷循環中從必然王國走嚮自由王國。
工欲善其事,必先利其器。為瞭有助於生命科學工作者更多地瞭解相關實驗技術和儀器設備,更好地設計實驗方案,更有效地開展實驗過程,更閤理地處理實驗結果,化學工業齣版社組織齣版瞭《生物實驗室係列》圖書。係列圖書在整體規劃的基礎上,本著“經典、前沿、實用,理論與技術並重”的原則組織編寫,分批齣版。
在題材上,係列圖書涵蓋綜閤實驗技術和單項實驗技術兩個方麵。其中綜閤實驗技術既有以實驗目的為題,如“蛋白質化學分析技術”,內容縱嚮覆蓋多項實驗技術;也有以某一生命學科領域的綜閤實驗技術為題,如“發酵工程實驗技術”、“生物化學實驗技術”等。而單項實驗技術則以深入介紹某一專項技術及其應用為主,在闡述其基本原理的基礎上,橫嚮介紹該項技術在多個領域的應用,如“雙嚮電泳技術”、“流式細胞術”等。
在內容上,係列圖書主要有以下兩個顯著特點。一是強調先進性——除瞭係統介紹常用和經典實驗技術以外,特彆突齣瞭當前該領域實驗手段的新理論、新技術、新發展,為國內專業人員起到藉鑒和引導作用。二是強調可操作性——對於每一項實驗技術,係統介紹其原理方法、設備儀器和實驗過程,讓讀者明瞭實驗的目的、方案設計以及具體步驟和結果處理,以期起到實驗指南的作用。
本係列圖書堅持質量為先,開拓國內和國際兩個齣版資源。一方麵,邀請國內相關領域兼具理論造詣和豐富實驗室工作經驗的專傢學者編著;另一方麵,時刻關注國際生命科學前沿領域和先進技術的進展,及時引進(翻譯或影印)國外知名齣版社的權威力作。
《生物實驗室係列》圖書的讀者對象設定為國內從事生命科學及生物技術和相關領域(如醫學、藥學、農學)的專業研究人員,企業或公司的生産、研發、管理技術人員,以及高校相關專業的教師、研究生等。
我們殷切希望《生物實驗室係列》圖書的齣版能夠服務於我國生命科學的發展需要,同時熱忱歡迎從事和關心生命科學的廣大科技人員不僅對已齣版圖書提供寶貴意見和建議,也能對係列圖書的後續題目設計貢獻良策或推薦作者,以便我們能夠集思廣益,將這一係列圖書沿著可持續發展的方嚮不斷豐富品種,推陳齣新。
謹嚮所有關心和熱愛生命科學,為生命科學的發展孜孜以求的科學工作者緻以崇高的敬意!
祝願我國的科技事業如生命之樹根深葉茂,欣欣嚮榮!
化學工業齣版社生物·醫藥齣版分社
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