包邮 北京大学 现代分子生物学 第四版 高等教育出版社 分子生物学教程 朱玉贤现代分子生物

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朱玉贤 著
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出版社: 高等教育出版社
ISBN:9787040351583
商品编码:1062849292
包装:平装
出版时间:2013-01-01

具体描述

基本信息

作者:朱玉贤

出版社:高等教育出版社

出版日期:2013-01-01

ISBN:9787040351583

字数:

页码:492

版次:4

装帧:平装

开本:16

商品重量:1.1kg

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插图:



5.5.2荧光差异显示双向电泳技术
早期的蛋白质组学研究内容主要是蛋白质组的表达模式,即利用常规2—DE技术鉴定并建立某一生物体在特定时期的全部蛋白表达谱。然而蛋白质组在各个生命进程中是动态变化的,不同生物的个体、组织或细胞在不同发育时期、分化阶段以及不同的生理、病理条件下基因表达是不一致的,所对应的蛋白质组也具有特异性。于是,比较蛋白质组学(parative proteomics)应运而生,并逐渐成为后基因组学时代重要学科。
近年来,一种在传统2—DE技术上结合了多重荧光分析技术的新方法——荧光差异显示双向电泳技术(2—D fluorescence difference gel electrophoresis,2D—DIGE)的发明基本解决了传统2—DE难以克服的系统误差白质浓度变化给出线性反应,而常规银染法只能检测低至1~60 ng的蛋白质,仅有约2个数量级的线性动态范围。
在DIGE技术中,内标(internal standard,IS)是所有实验样本的混合物,凝胶中的每个蛋白点都有自己的内标,不同样本间蛋白质的比较是基于每个蛋白点相对于凝胶内内标的相对变化,分析软件根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校正,保证检测到真实的蛋白质丰度变化。由于同一实验中所有凝胶都使用同一内标,每种蛋白质都可以通过内标与其他任何凝胶上的同种蛋白质进行有效的比较。内标的引入,增加了凝胶间匹配的可信度,有效地鉴别系统误差或者样品中的生物学变化,并进行准确的定量分析。
虽然2D—DIGE技术本身的优势大大降低了实验中出现的系统误差,但是由于所用荧光染料在不同波长激发光下表现出不同的荧光特性,低丰度蛋白质定量时较易出现偏差。

序言



探索生命奥秘的基石:现代分子生物学概览 生命,这个由无数复杂而精妙的分子构成的宏大体系,其运作的底层逻辑一直牵引着人类探索的脚步。从宏观的生物体到微观的细胞,再到更深层次的DNA、RNA、蛋白质分子,分子生物学正是致力于揭示这一切的内在联系与规律。它不仅是一门学科,更是理解生命现象、疾病根源以及未来生物技术发展的关键钥匙。 一、 分子生物学的核心概念与研究对象 分子生物学,顾名思义,是以分子的视角来研究生物学现象。其核心在于理解生命活动中最基本的分子单元——核酸(DNA和RNA)与蛋白质——在遗传信息的传递、表达、调控以及生命过程中的功能。 1. 遗传物质的本质:DNA 脱氧核糖核酸(DNA)是绝大多数生物体的遗传物质。它的双螺旋结构,如同生命的蓝图,精确地编码着构成生命体的所有信息。DNA的分子结构,包括其由核苷酸构成的碱基序列(A、T、C、G),直接决定了生物体的遗传性状。DNA的复制过程,确保了遗传信息的准确传递给下一代。理解DNA的结构、复制机制及其在基因组中的排列方式,是分子生物学的首要任务。 2. 遗传信息的载体与执行者:RNA 核糖核酸(RNA)在遗传信息的传递和蛋白质的合成中扮演着至关重要的角色。不同类型的RNA(如信使RNA mRNA、转运RNA tRNA、核糖体RNA rRNA)各司其职,共同构建起从DNA信息到蛋白质功能之间的桥梁。mRNA携带DNA的遗传密码,tRNA负责将氨基酸运送到核糖体,rRNA则是核糖体结构和催化活性的核心组成部分。RNA的转录、剪接、修饰等过程,也是分子生物学研究的重要内容。 3. 生命的执行者:蛋白质 蛋白质是生命活动最主要的执行者,它们构成细胞的结构,执行着几乎所有的生物化学反应,并参与信号传导、物质运输等关键过程。蛋白质的功能与其三维结构紧密相关,而蛋白质的结构则由其氨基酸序列决定,这一序列又是由DNA编码的。蛋白质的合成(翻译)、折叠、修饰以及其在细胞内的定位和相互作用,是分子生物学研究的另一个核心领域。 4. 基因的表达与调控 基因是DNA上的特定片段,编码着特定的蛋白质或功能性RNA分子。基因的表达是一个复杂的过程,包括转录和翻译。然而,并非所有基因都在同一时间、同一地点以相同的强度表达。基因表达的精确调控是细胞响应环境变化、执行特定功能、分化发育的基础。分子生物学深入研究各种转录因子、信号通路、表观遗传修饰等调控机制,揭示生命体的精细化运作。 二、 分子生物学的关键研究技术与方法 为了深入理解上述核心概念,分子生物学发展了一系列强大的研究技术和方法。这些技术使得研究者能够以前所未有的精度操纵和分析生命分子的活动。 1. 分离与纯化技术: 在对特定分子进行深入研究之前,首先需要将其从复杂的生物样品中分离出来并纯化。例如,利用差速离心、层析技术(如离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤层析)可以分离不同大小、电荷、疏水性或特异性结合能力的分子。 2. 核酸研究技术: DNA/RNA提取与鉴定: 掌握高效提取DNA和RNA的方法,并对其纯度和浓度进行定量检测,是后续实验的基础。 PCR(聚合酶链式反应): 这是一项革命性的技术,可以指数级地扩增DNA片段,使得从少量DNA中获得足够的研究材料成为可能。PCR的应用范围极广,包括基因克隆、基因分型、DNA测序等。 DNA/RNA测序: 通过测序技术(如Sanger测序、新一代测序NGS)确定DNA或RNA的碱基序列,这是解读遗传信息、识别基因、研究基因组变异的根本手段。 Southern/Northern Blotting: 这些技术利用核酸探针特异性地检测和鉴定样品中的特定DNA或RNA分子,常用于研究基因的存在、拷贝数、转录水平等。 DNA/RNA体外合成与修饰: 通过化学方法合成特定序列的DNA/RNA分子,或对其进行化学修饰,为研究DNA/RNA的功能和相互作用提供工具。 3. 蛋白质研究技术: 蛋白质提取与纯化: 类似于核酸,蛋白质的提取和纯化也依赖于各种生化分离技术。 SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳): 这是分离和鉴定蛋白质最常用的方法,可以根据蛋白质的分子量进行分离。 Western Blotting: 类似于Southern/Northern Blotting,Western Blotting利用抗体作为探针,特异性地检测和定量样品中的特定蛋白质。 质谱技术(Mass Spectrometry): 质谱技术在蛋白质组学研究中发挥着核心作用,可以精确测定蛋白质的分子量,鉴定蛋白质,甚至分析蛋白质的修饰。 蛋白质晶体学与NMR: 这些技术是解析蛋白质三维结构的金标准,蛋白质结构与其功能密切相关,了解蛋白质的精确三维构象对于理解其工作机制至关重要。 蛋白质相互作用分析: yeast two-hybrid系统、Co-IP(免疫共沉淀)等技术可以研究蛋白质之间的相互作用,了解蛋白质如何在细胞内形成复合物,协同完成功能。 4. 基因组学与生物信息学: 随着测序技术的飞速发展,产生了海量的基因组数据。基因组学研究致力于解析整个基因组的结构、功能和变异。生物信息学则为处理和分析这些海量数据提供了强大的工具和算法,包括序列比对、基因预测、功能注释、系统发育分析等。 5. 基因编辑技术: CRISPR-Cas9等基因编辑技术的出现,是分子生物学领域的一项重大突破。它使得研究者能够精确地在基因组的特定位点进行DNA的敲除、插入或修改,从而更深入地研究基因的功能,并为基因治疗提供了新的希望。 三、 分子生物学在生命科学领域的广泛应用 分子生物学不仅仅是基础理论研究,其研究成果已经深刻地影响并推动了众多生命科学分支领域的发展,并在实际应用中展现出巨大的价值。 1. 医学与疾病研究: 疾病机理的阐明: 许多疾病,如癌症、遗传病、病毒感染等,其根源都与基因突变、基因表达异常或蛋白质功能障碍有关。分子生物学技术使得研究者能够深入解析这些疾病的分子机制,为诊断和治疗提供靶点。 基因诊断与产前筛查: 通过DNA测序和基因检测技术,可以诊断多种遗传性疾病,并进行产前筛查,为优生优育提供科学依据。 药物开发与靶向治疗: 分子生物学研究为新药开发提供了重要的靶点。例如,开发能够抑制癌细胞生长、阻断病毒复制或纠正基因缺陷的药物。靶向治疗更是直接针对疾病相关的特定分子,提高疗效并减少副作用。 疫苗研发: 现代疫苗的研发,如mRNA疫苗,正是基于对病毒遗传物质和蛋白质合成机制的深刻理解。 2. 农业与食品科学: 动植物育种: 分子标记辅助育种、基因工程育种等技术,可以培育出高产、抗病、抗逆、营养价值更高的动植物品种,提高农业生产效率,保障粮食安全。 食品安全检测: 利用PCR等技术,可以快速、准确地检测食品中的微生物污染、转基因成分或非法添加物。 功能性食品开发: 通过基因工程手段,可以在食品中生产具有特定健康益处的物质。 3. 生物技术与产业: 重组DNA技术与生物制药: 利用基因工程技术,可以在微生物或细胞中生产治疗性蛋白质,如胰岛素、生长激素、干扰素等,极大地改善了许多疾病的治疗效果。 生物能源: 分子生物学在开发利用生物质能源方面也发挥着重要作用,例如通过基因工程改造微生物,提高其产生生物燃料的效率。 环境修复: 利用微生物的降解能力,可以开发生物修复技术,处理环境污染物。 4. 生态学与进化生物学: 物种鉴定与分类: DNA条形码等技术可以快速准确地鉴定物种,并帮助研究物种之间的亲缘关系。 种群遗传学研究: 分子标记可以用于研究种群的遗传多样性、迁移历史和适应性进化。 古 DNA 研究: 从古生物遗骸中提取DNA,可以揭示古代生物的遗传信息,研究生物进化历程。 四、 分子生物学的前沿探索与未来展望 尽管分子生物学已经取得了辉煌的成就,但对生命奥秘的探索永无止境。当前,分子生物学正处于一个快速发展的时代,前沿的研究方向不断涌现: 系统生物学: 试图将分子生物学研究从单一基因、单一分子提升到对整个生命系统进行整体、动态、定量的研究,理解分子之间的复杂相互作用网络。 合成生物学: 旨在设计和构建人工生命系统,或者对现有生物系统进行重新设计,以创造具有新功能的生物体或生物装置。 表观遗传学: 研究在不改变DNA序列的情况下,基因表达调控的遗传现象,如DNA甲基化、组蛋白修饰等,这对于理解发育、疾病和衰老至关重要。 单细胞分析: 随着技术的发展,对单个细胞的基因表达、蛋白质含量进行分析成为可能,这将有助于理解细胞异质性以及细胞在群体中的微环境影响。 肠道微生物组学: 肠道中的微生物群落对宿主的健康有着深远的影响,分子生物学技术正在帮助我们揭示这些微生物与宿主之间的复杂互作。 总而言之,分子生物学以其强大的研究工具和深刻的理论体系,不断拓展着我们对生命本质的认知边界。它不仅是理解生命世界的基础,更是未来医学、农业、工业等领域创新发展的强大引擎。掌握分子生物学的基本原理和研究方法,意味着掌握了探索生命奥秘的金钥匙,并有机会参与到塑造人类未来的科技革命之中。

用户评价

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这本书的学术严谨性毋庸置疑,但同时,它也并不乏人情味。我注意到,在某些章节的讲解中,作者会提及一些经典的实验故事,或者引用一些在分子生物学领域做出杰出贡献的科学家的观点。这些“小插曲”的穿插,让原本可能显得枯燥的理论知识,变得生动有趣起来。它们不仅丰富了我的知识,更让我感受到了科学探索的魅力和人类智慧的光辉。例如,在讲解基因密码的破译过程时,书中会生动地描述科学家们如何通过一步步的实验,最终揭示了那个影响深远的密码本。这样的叙述,让我觉得科学研究不再是冰冷的公式和数据,而是充满着智慧、毅力和激情的伟大事业。

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这本书的语言风格和叙事方式,也让我觉得非常舒服。尽管涉及的是非常专业的领域,但作者的行文流畅,逻辑清晰,即使是复杂的概念,也能被解释得浅显易懂。我特别欣赏书中对一些“为什么”的深入剖析。比如,在讲解DNA损伤修复机制时,书中并没有简单地罗列各种修复途径,而是会从DNA损伤的发生原因、对细胞的潜在危害出发,循序渐进地解释不同修复机制的必要性和优越性。这种“追根溯源”的讲解方式,极大地提升了我对知识的理解深度,也让我能够更好地将零散的知识点串联起来,形成一个完整的知识体系。很多时候,我会在阅读的过程中,不自觉地思考作者是如何组织这些内容的,是如何将如此庞杂的知识梳理得井井有条的。这本身也是一种学习的过程。

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这本书的排版设计也给我留下了深刻的印象。在阅读过程中,我时常被书中的插图和表格所吸引。这些图表不仅精美,而且信息量巨大,将抽象的分子过程形象地展示出来,大大降低了理解的难度。例如,在讲解转录调控时,书中有一个非常精巧的示意图,清晰地描绘了转录因子如何与启动子、增强子、沉默子等元件相互作用,从而精确控制基因的表达。这样的图示,比单纯的文字描述要直观得多,也更容易让人记忆深刻。此外,书中对实验技术的介绍也做得相当到位,无论是DNA提取、PCR、基因克隆,还是蛋白质表达和纯化,都给出了详细的操作步骤和注意事项。这对于我们这些有志于从事科研工作的学生来说,简直是无价之宝。我曾经在实验室遇到过一些技术难题,翻阅这本书,往往能找到相关的解决方案或者启发。而且,作者在讲解技术时,也很注重追溯其发展历史和科学原理,这让我不仅仅是学会“怎么做”,更能理解“为什么这么做”。这种深入的讲解,极大地增强了我对实验的信心和操作的准确性。这本书,就像一个忠实的实验室助手,总能在关键时刻给予我最需要的指导。

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我特别喜欢这本书的“提问式”引入和“总结式”回顾。在每一个章节的开头,作者常常会抛出一个引人入胜的问题,或者描述一个现象,然后引导读者去思考背后的分子机制。例如,在讲解基因表达的调控时,作者可能会以“为什么同一个生物体,不同细胞表现出不同的功能?”这样的问题开篇,然后逐步揭示基因选择性表达的奥秘。这种方式极大地激发了我的好奇心和求知欲。而在章节的末尾,则会进行精炼的总结,将本章的重点内容进行梳理,帮助我巩固记忆,也方便我日后回顾。这种“提出问题-解答问题-总结问题”的教学设计,让我感觉自己不再是被动地接受灌输,而是主动地参与到知识的建构过程中。

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在阅读《北京大学 现代分子生物学 第四版》的过程中,我最深的体会之一是,它不仅仅是一本教材,更像是一部分子生物学领域的“百科全书”。虽然我还没有完全读完,但已经能感受到其内容的广度和深度。作者在介绍基础概念的同时,还引入了大量前沿的研究进展和相关的伦理问题。比如,在讨论基因编辑技术(如CRISPR-Cas9)时,书中不仅详细介绍了其作用机制和应用前景,还专门开辟了一个章节,探讨了这项技术可能带来的社会影响和伦理困境。这让我意识到,作为一名未来的科学家,我们不仅要掌握专业知识,更要具备批判性思维和人文关怀。这种将科学技术与社会伦理相结合的视角,在同类教材中是比较少见的,也让这本书显得尤为珍贵。此外,书中对一些经典实验的梳理和介绍,如Meselson-Stahl实验、Hershey-Chase实验等,也让我对分子生物学的发展历程有了更清晰的认识。理解这些里程碑式的实验,有助于我们更深刻地理解分子生物学核心概念的由来和演变。

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坦白说,这本书的难度确实不小,初次翻阅时,我甚至有些担心自己是否能完全理解。但是,随着阅读的深入,我发现这本书的韧性非常强。它不仅仅是知识的罗列,更是对科学思维的培养。比如,在讲解信号转导通路时,书中会详细分析不同信号分子如何层层传递信息,以及每一个环节可能存在的调控机制。这促使我主动去思考,如果某一环节发生异常,会对整个通路产生怎样的影响,这背后可能隐藏着哪些疾病的根源。这种引导式、启发式的学习方式,是我之前在其他教材上很少体验到的。更让我感到惊喜的是,书中还巧妙地穿插了一些案例分析,将理论知识与实际应用相结合。例如,在讨论基因治疗时,书中会引用一些成功的临床案例,以及在研究和发展过程中遇到的挑战。这让我看到,分子生物学不仅仅是实验室里的理论,更是能够改变人类生活,解决实际问题的强大工具。

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这本书的价值,在我看来,远不止于课堂教学。它更像是一本可以陪伴我整个学术生涯的参考书。我常常在遇到不确定的概念时,翻阅这本书,总能找到最权威、最清晰的解释。而且,书中对未来发展趋势的展望,也让我对分子生物学领域的前景充满了期待。我记得在关于基因组学和蛋白质组学的部分,作者不仅介绍了这些技术的基本原理,还探讨了它们在疾病诊断、药物研发等领域的应用前景。这让我明白,学习分子生物学,不仅仅是学习现有的知识,更是要为未来的科学发展做好准备。这本书,就像一位睿智的长者,不仅传授我知识,更启迪我的思考,引导我走向更广阔的学术海洋。

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这本书对于我来说,最大的价值在于它提供了一个非常全面且深入的分子生物学学习框架。我一直认为,学习一门学科,最重要的不是记住所有的细节,而是理解其核心的逻辑和方法论。而这本书恰恰在这方面做得非常出色。在讲解DNA损伤和修复时,我注意到作者不仅仅是简单地介绍几种修复机制,而是会从DNA结构的脆弱性出发,详细阐述为什么修复机制是必需的,以及不同修复机制的演化和选择。这种从根本上解释“为什么”的态度,让我对生命体的精妙设计有了更深的敬畏。而且,书中对各种分子生物学工具的介绍,也并非停留在工具的表面,而是会深入探讨其背后的原理,以及在不同研究场景下的适用性。这种对原理的透彻讲解,让我能够举一反三,在面对新的研究问题时,能够更灵活地运用所学的知识和技术。

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拿到这本《北京大学 现代分子生物学 第四版》已经有些日子了,我一直想静下心来好好写写我的阅读感受。不得不说,这本书的体量确实不小,拿到手沉甸甸的,翻开扉页,看到朱玉贤老师的名字,心中便涌起一种莫名的敬意。我对分子生物学一直有着浓厚的兴趣,虽然之前也看过一些入门级的教材,但总觉得不够深入,不够系统。这本书的出现,正好填补了我知识上的空白。从前几章开始,作者就以非常严谨的逻辑,一步一步地构建起分子生物学知识的大厦。比如,在讲解DNA复制的时候,作者不仅详细阐述了复制叉的形成、DNA聚合酶的作用机制,还深入探讨了复制的精确性是如何保证的,比如错配修复机制等。这些细节的呈现,让我感觉自己不再是被动地接受知识,而是真正参与到了理解分子世界的过程中。而且,书中穿插的许多实验设计和结果分析,更是让我大开眼界。我记得有一段关于PCR技术的讲解,不仅仅是介绍原理,还详细对比了不同种类的PCR,比如qPCR,以及它们在不同应用场景下的优势。这让我明白,科学知识的学习不仅仅是理论的堆砌,更是对实践过程的理解和掌握。总而言之,这本书为我打开了一扇通往分子生物学深邃殿堂的大门,让我对这个领域有了更宏观、更细致的认识,也激发了我进一步探索的热情。

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阅读这本书的过程,就像是在攀登一座巍峨的高山。每一章的内容都像一个独立的营地,提供了不同角度的风景。作者仿佛是一位经验丰富的向导,他不仅带领我攀登,还会为我指引方向,告诉我哪里有险峻之处,哪里有壮丽的风景。我对书中关于遗传信息传递的详细论述印象深刻,特别是对mRNA的加工和修饰,以及蛋白质合成过程中发生的各种精细调控。这些内容,往往是其他教材中一带而过的。作者在这里花了大量笔墨,从剪接、加帽、加尾到核输出,再到核糖体的组装和翻译起始,每一个环节都描绘得细致入微,让我深刻理解了基因表达的复杂性和精确性。

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