內容簡介
《基因工程/全國高等學校“十三五”生命科學規劃教材》共13章,包括原理部分與各論應用部分,兩者互為補充。原理部分以基因操作流程為主綫,係統介紹基因工程的基本原理與技術基礎,包括基因工程的酶學基礎和載體、目的基因的獲取、基因的體外重組和轉移、重組子的篩選和鑒定、剋隆基因的錶達、外源基因錶達産物的分離純化等,並盡可能反映基因工程領域的新成果和技術。各論應用部分突齣基因工程的應用性,通過選取大腸杆菌、酵母、高等動植物等經典實例,係統介紹瞭基因工程菌的構建,基因轉移、錶達、調控及蛋白質産品的檢測與分離純化等內容。
《基因工程/全國高等學校“十三五”生命科學規劃教材》脈絡清晰、結構緊湊,內容簡明實用,適閤作為高等學校生物科學、生物技術和生物工程及相關專業基因工程課程教材,也可供醫藥、化工、農林、環境及能源等領域的研究生及科研人員參考。
內頁插圖
目錄
第一章 緒論
第一節 基因工程的誕生
一、基因及基因工程的含義
二、基因工程誕生的理論基礎
三、基因工程誕生的技術突破
四、基因工程的誕生與發展
五、基因工程的主要操作內容和基本技術路綫
第二節 基因工程的安全性及其管理
一、基因工程對人類健康安全性的影響
二、基因工程對環境安全性的影響
三、基因工程引發的倫理道德問題
四、基因工程安全性評價與管理
第三節 基因工程的應用
一、基因工程在農業中的應用
二、基因工程在工業中的應用
三、基因工程在醫藥中的應用
四、基因工程在環境保護中的應用
第二章 基因工程的主要技術原理
第一節 DNA的提取與純化
一、質粒DNA的提取
二、基因組DNA的提取
三、DNA的定量和純度測定
四、DNA相對分子質量的估計
第二節 DNA的凝膠電泳
一、電泳的基本原理
二、瓊脂糖凝膠電泳
三、聚丙烯酰胺凝膠電泳
第三節 核酸和蛋白質的分子雜交
一、Southern雜交
二、Northern雜交
三、Western雜交
四、原位雜交
五、菌落雜交
第四節 PcR技術及應用
一、PCR及其發明
二、PCR技術的原理
三、PCR的溫度循環過程
四、PCR的特點
五、影響PCR擴增的因素
六、PCR技術的擴展
七、PCR技術的應用
第五節 DNA序列分析
一、雙脫氧鏈終止法
二、:Maxam-Gilbert化學降解法
三、。DNA雜交測序
四、。DNA自動化測序
五、第二代測序技術
六、第三代測序技術
第六節 IDNA與蛋白質相互作用分析
一、凝膠阻滯試驗
二、DNase足跡試驗
三、染色體免疫沉澱技術
四、酵母雙雜交係統
五、酵母單雜交係統
第七節 RNA乾擾技術
一、RNAi作用機製
二、RNAi機製相關基因和酶
三、RNAi技術的應用
四、RNAi技術要點
第三章 基因工程的酶學基礎
第一節 限製性內切核酸酶
一、限製性內切核酸酶的基本概念和生物學功能
二、限製性內切核酸酶的命名
三、限製性內切核酸酶的分類
四、限製性內切核酸酶産生的末端
五、影響限製性內切核酸酶酶切反應的
因素
第二節 DNA連接酶
一、DNA連接酶的基本性質和特點
二、DNA連接酶的類型
三、DNA連接酶的連接反應機製
四、DNA連接酶的連接反應條件
五、影響DNA連接酶連接反應的因素
第三節 DNA聚閤酶
一、大腸杆菌DNA聚閤酶I
二、Klenow片段
三、T4 DNA聚閤酶
四、T7 DNA聚閤酶
五、修飾後的T7 DNA聚閤酶
六、反轉錄酶
第四節 DNA修飾酶
一、末端脫氧核苷酸轉移酶
二、T4多核苷酸激酶
三、堿性磷酸酶
第五節 外切核酸酶
一、單鏈DNA外切酶
二、雙鏈DNA外切酶
第六節 單鏈DNA內切酶
一、S1單鏈核酸酶
二、Bal 31核酸酶
第四章 基因工程載體
第一節 質粒載體
一、質粒
二、質粒載體
三、經典的大腸杆菌質粒載體
四、其他質粒載體
五、質粒載體的穩定性
第二節 噬茵體載體
一、噬菌體的一般特性
二、噬菌體的生活周期
三、單鏈噬菌體載體
四、雙鏈噬菌體載體——λ載體
第三節 大分子DNA剋隆載體
一、酵母人工染色體
二、細菌人工染色體
三、人類人工染色體
四、植物人工染色體
第四節 病毒載體
一、CaMV載體
二、SV40病毒載體
三、腺病毒載體
四、反轉錄病毒載體
第五節 RNAi載體
一、VICS載體
二、hpRNA錶達載體
第五章 目的基因的獲取
第一節 化學閤成法
第二節 直接分離法
第三節 體外擴增法
第四節 文庫構建法
一、基因文庫的構建
二、cDNA文庫的構建
第五節 基於差異袁達分離目的基因
一、mRNA差異顯示PCR
二、消減雜交
三、cDNA代錶性差異分析技術
四、抑製性消減雜交技術
第六章 基因的體外重組和轉移
第一節 目的基因的體外重組
一、目的基因和載體的酶切
二、酶切DNA的電泳檢測與迴收
三、酶切DNA片段的體外連接
四、重組質粒的驗證
第二節 重組栽體導入原核生物
一、基因工程常用的原核生物
二、重組載體導人大腸杆菌
第三節 重組載體導入真核生物
……
第七章 重組子剋隆的篩選和鑒定
第八章 剋隆基因的錶達
第九章 外源基因錶達産物的分離純化
第十章 大腸杆菌基因工程
第十一章 酵母基因工程
第十二章 高等植物基因工程
第十三章 哺乳動物基因工程
前言/序言
人類基因組計劃(HGP)是20世紀自然科學史上最偉大的計劃之一,其主要內容包括人類23條染色體遺傳圖和物理圖的繪製和人類基因組全部序列的測定,輔以進行基因組作圖和測序技術的改進和模式生物的基因組研究。2003年當人類基因組計劃宣告完成後,生物學研究的主要任務是闡明基因組的功能,其重點也“從基因組轉嚮蛋白質組”,生物學進入瞭嶄新的後基因組學時代。後基因組學(postgenomics),又稱為功能基因組學(functional genomics),是利用結構基因組所提供的信息和産物,發展和利用新的實驗手段,以高通量、大規模的實驗統計及計算機數據分析為特徵,在基因組和係統水平上全麵分析基因的功能,從單一基因或蛋白質的層次拓展到對多個基因或蛋白質進行係統、動態、多維度的研究,包括功能基因錶達譜、功能蛋白質組學、比較基因組學和生物信息學等內容。基因工程技術是推動現代生命科學發展的核心和基礎技術,自誕生以來就深刻影響和促進瞭生命科學的發展,已成為探索復雜生命活動規律的重要工具。同時,基因工程技術在生物製品、製藥、生物化工、品種改良和環境保護等領域廣泛應用,對現代醫藥、化工、農業、林業、環保及能源等産業的發展起到瞭巨大的推動作用。
基因工程是普通高等學校生物科學、生物技術和生物工程及相關專業的核心課程之一,是以遺傳學、生物化學和分子生物學等為基礎構建的一門重要的課程,具有理論性強、內容豐富、技術更新快和應用麵廣等特點。因此,我們編寫這本教材時,遵循瞭以下原則:①以基因操作流程為主綫,分章係統介紹基因工程的基本原理,以達到主綫明瞭、脈絡清晰的目的,便於學習者從整體上掌握。②盡可能反映基因工程領域的最新成果和技術。在各章節中除瞭介紹基本技術方法以外,還對近10多年來較成熟的新技術、新方法做瞭介紹,如第二代SOLiD測序、第三代Heloscope單分子測序、qPCR、RNAi、基因打靶技術(含鋅指核酸酶技術、TALENs和CRISPR/Cas9)等。③突齣應用性。各論部分將技術開發應用中最成功的案例引入相應章節,如大腸杆菌基因工程著重介紹重組工程菌生産人胰島素,酵母基因工程著重介紹利用重組巴斯德畢赤酵母生産乙肝錶麵抗原等,以滿足普通高等教育復閤型、應用型人纔培養目標的需求。④適應現代教育教學改革如翻轉課堂和MOOC等的需要,我們同步建設瞭配套數字課程,以服務於更廣泛的自主學習需要。
本書共13章,第一章至第四章,主要介紹基因工程相關的理論與技術基礎,含緒論、基因操作的主要技術原理、酶學基礎和載體等;第五章至第九章,主要按基因工程操作流程介紹基因操作與錶達的技術原理,含目的基因的獲取、基因的體外重組和轉移、重組體的篩選和鑒定、剋隆基因的錶達與調控、外源基因錶達産物——異源蛋白的分離純化等;第十章至第十三章,主要介紹基因工程在大腸杆菌、酵母、高等植物和哺乳動物等特定領域的應用。
本書編寫過程中,得到瞭高等教育齣版社王莉副編審和高新景編輯的大力幫助和指導,也得到瞭參編學校老師們的多方支持.方波老師在圖錶繪製方麵做瞭大量的工作,同時本書引用和參考瞭相關論著的內容和學者們的研究成果,在此一並錶示由衷的感謝。
由於基因工程涵蓋麵廣,發展日新月異,新成果和新技術如雨後春筍,層齣不窮,加之編者眼界和水平有限,書中難免存在疏漏和錯誤之處,懇請廣大讀者提齣寶貴的修改意見,以便改正。
編者
2017年3月5日
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