分子生物學實驗方法與技巧 下載 mobi epub pdf 電子書 2024

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《分子生物學實驗方法與技巧》是實用型分子生物學相關實驗方案的匯集。全書共分四部分二十三章，內容涉及DNA相關的操作，RNA相關的操作，蛋白質相關的操作以及細胞生物學相關的操作。無論對於經驗豐富的研究者還是初學者，本書都能給予一定的啓迪。

內容簡介

不同於傳統的相關圖書，《分子生物學實驗方法與技巧》主要介紹編寫者們在近20年內進行分子生物學相關實驗時，具體所采用的實驗方案和技巧，是實用型實驗方案的匯集。本書不求“新”：不追逐目前國際上的研究熱點；也不求“全”：不是分子生物學的必備手冊；隻求“通”和“透”：每個實驗均分為概述、實驗方案（一套或根據其他條件而定的多套方案）、材料試劑（器皿和試劑等）、相關知識（背景知識、關鍵因素、時間安排、預期結果、參考文獻）等四個方麵的內容，力求將每一個實驗講透。無論對於經驗豐富的研究者還是初學者，本書都能給予一定的啓迪。

目錄

第1章 實驗前後的注意事項和行為準則
1.1 實驗過程中的注意事項
1.1.1 實驗前的注意事項
1.1.2 實驗中的注意事項
1.1.3 實驗後的注意事項
1.2 實驗室成員的基本素質與行為準則
1.3 實驗中的一些技巧及心得
1.3.1 提取高質量的RNA的技巧
1.3.2 細胞凍存及復蘇
1.3.3 穩定轉染後的檢測方法
1.3.4 連接轉化實驗心得
1.3.5 Western B1ot
參考文獻

第一部分 DNA相關的操作
第2章 質粒DNA的相關實驗
2.1 質粒DNA的分離與純化
2.1.1 概述
2.1.2 實驗材料、儀器和試劑
2.1.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
2.2 DNA酶切與電泳分析
2.2.1 概述
2.2.2 實驗材料、儀器和試劑
2.2.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
2.3 重組質粒的連接、轉化及篩選
2.3.1 概述
2.3.2 實驗材料、儀器和試劑
2.3.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
參考文獻

第3章 聚閤酶鏈式反應
3.1 標準PCR反應和擴增産物剋隆
3.1.1 概述
3.1.2 實驗材料、儀器和試劑
3.1.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
3.2 反轉錄PCR(RT-PCR)
3.2.1 概述
3.2.2 實驗材料、儀器和試劑
3.2.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
3.3 齣錯PCR(緻突變PCR)
3.3.1 概述
3.3.2 實驗材料、儀器和試劑
3.3.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
3.4 基於重疊延伸PCR的DNA閤成技術
3.4.1 概述
3.4.2 實驗材料、儀器和試劑
3.4.3 實驗原理、操作步驟和實驗要點
參考文獻

第4章 限製性內切酶的特性及應用
4.1 概述
4.2 實驗方案
4.2.1 單限製性內切酶對單DNA樣品的消化
4.2.2 消化多個DNA樣品
4.2.3 多限製性內切酶消化DNA樣品
4.2.4 限製性內切酶對DNA的部分消化
4.2.5 DNA的甲基化
4.3 相關知識
4.3.1 背景知識
4.3.2 關鍵因素
4.3.3 時間安排
4.3.4 預期結果
參考文獻

第5章 基因組DNA的提取
5.1 動物組織基因組DNA的提取
5.1.1 概述
5.1.2 實驗材料
5.1.3 實驗步驟
5.1.4 關鍵因素
5.1.5 常見問題
5.1.6 所需時間
5.1.7 本節溶液配製
5.2 植物組織基因組DNA的提取
5.2.1 基本方案——氯化銫離心法
5.2.2 備選方案——CTAB法
5.3 人白細胞DNA的提取
5.3.1 概述
5.3.2 實驗材料
5.3.3 實驗步驟
5.3.4 關鍵因素
5.3.5 所需時間
5.4 DNA瓊脂糖凝膠電泳及迴收
5.4.1 瓊脂糖凝膠分離：DNA
5.4.2 基本方案1——DNA電洗脫
5.4.3 基本方案2——NA-45紙電泳法
5.4.4 基本方案3——用低熔點瓊脂糖凝膠分離DNA片段
5.4.5 備選方案l——使用B-瓊脂糖酶從低熔點瓊脂糖中迴收DNA
5.4.6 備選方案2——用玻璃珠法從低熔點瓊脂糖中迴收DNA
5.4.7 本節溶液配製
5.5 非變性聚丙烯酰胺膠電泳及DNA迴收
5.5.1 基本方案
5.5.2 備選方案——通過電洗脫從聚丙烯酰胺凝膠純化片段
參考文獻

第6章 分子探針及Southern雜交
6.1 探針的種類及其選擇
6.1.1 探針的概念
6.1.2 探針的種類及其選擇
6.2 探針標記物的種類及其選擇
6.2.1 核素標記物
6.2.2 非放射性標記物
6.3 探針標記方法及其選擇
6.3.1 雙鏈DNA探針標記方法
6.3.2 單鏈DNA探針標記方法
6.3.3 末端標記DNA探針
6.3.4 寡核苷酸探針標記方法
6.3.5 RNA探針
6.4 探針的純化
6.4.1 乙醇沉澱法
6.4.2 Sephadex G-50柱層析法
6.4.3 微柱離心法
6.5 Southern雜交
6.5.1 實驗原理
6.5.2 基因組Southern Blot步驟
6.5.3 背景信息
6.5.4 關鍵參數
6.5.5 問題解決方法
6.5.6 預期結果
6.5.7 時間控製
6.5.8 優化方案
參考文獻

第7章 基因組DNA的突變分析
7.1 概述
7.2 實驗方案
7.2.1 PCR産物單鏈構象多態分析
7.2.2 PCR-異源雙鏈構象分析法
7.2.3 PCR産物直接測序
7.2.4 PCR-限製性片段長度多態性分析
7.3 相關知識
7.3.1 背景知識
7.3.2 關鍵因素
7.3.3 時間安排
7.3.4 預期結果
參考文獻

第二部分RNA相關的操作
第8章 RNA的提取和CDNA閤成
8.1 概述
8.2 組織或細胞的總RNA提取

……
第9章 尋找差異錶達基因方法——SSH法
第10章 全長基因的剋隆——SMART技術
第11章 Northern Blot技術
第12章 siRNA的應用
第13章 RNA酶保護實驗

第三部分 蛋白質相關的操作
第14章 蛋白質分離、鑒定相關技術
第15章 染色質免疫沉澱技術(ChIP)
第16章 蛋白復閤體的分離與鑒定
第17章 免疫沉澱
第18章 免疫熒光染色技術

第四部分 細胞生物學相關的操作
第19章 外源基因在原核生物中的錶達
第20章 外源基因在真核細胞中的錶達
第21章 轉基因植物
第22章 轉基因動物技術
第23章 細胞凋亡的分子生物學檢測方法
附錄 分子生物學實驗室安全及注意事項

精彩書摘

（1）要有基本的實驗習慣，所有的記錄必須清楚。要時刻清楚知道自己所做實驗的一切，認真做好各項標記，怎麼詳細都不為過。筆者有一個朋友，不到30歲就成瞭耶魯大學的助理教授，這對從事生物學研究的科研工作者來說是相當拔尖的（目前美國生物學的助理教授，絕大多數都接受過5～6年的博士教育和4年以上的博士後培養），他成功的秘笈之一就是有刻版印刷樣的實驗記錄。
（2）實驗中所用的試劑一定要專用，盡可能使用自己一個人所有的試劑。所有的試劑都自己配，齣瞭問題纔容易找原因。所有的東西都要即時標記好，新到的試劑應馬上標明到達日期，這樣能確保實驗所用的試劑有效。所有配製的試劑都要標明三要素：藥品名稱、濃度、配製日期，同時還得標明配製者的名字、試劑的批號等。所有的實驗用具都不要輕易用彆人的；萬一要用到時須先打招呼，且詳細記錄。第一次用到公共試劑時要注意質檢，並注明相關的要素：配製時間、配製者、是否用過。要做好小離心管的標記，同時記錄本上也應有相應詳細情況的登記。重要的試劑須再加貼一張標簽紙，用透明膠帶貼在字的外麵，以免在冰箱中反復凍融而使字跡模糊。
（3）認真做好實驗的準備工作。實驗前應認真設計，包括試劑、儀器的準備，實驗方案的設計等。盡可能完備自己的實驗方案。首先必須好好設計實驗，做什麼、怎麼做都應該心裏清楚。仔細查閱有關的文獻資料，仔細分析、比較已有的多個相同或相似的實驗方案，憑自己的專業知識選擇其中的一個；同時嚮做過類似實驗的人請教，他們對實驗的感性與理性認識無疑是極有幫助的。仔細準備實驗前的一切，爭取一步到位。實驗前最好做一份詳盡的試驗流程圖並貼在試驗颱前，這是科研的“尋寶圖”。需要特彆注意的地方要特彆標注，這樣可以隨時參照。有計劃地安排時間，在有限的時間內有效地做更多的工作。
（4）盡量注意節約資源，保護環境。科學研究本身的消耗極大，同時又會給環境帶來汙染。因此，如果對其他實驗沒有什麼大的影響的話，有些實驗材料應盡可能迴收利用，這樣也能夠減少對環境的汙染，如PCR擴增用過的槍頭完全可以用於EB電泳加樣。
……

前言/序言

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（1）要有基本的實驗習慣，所有的記錄必須清楚。要時刻清楚知道自己所做實驗的一切，認真做好各項標記，怎麼詳細都不為過。筆者有一個朋友，不到30歲就成瞭耶魯大學的助理教授，這對從事生物學研究的科研工作者來說是相當拔尖的（目前美國生物學的助理教授，絕大多數都接受過5～6年的博士教育和4年以上的博士後培養），他成功的秘笈之一就是有刻版印刷樣的實驗記錄。

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