分子克隆实验指南-(上.中.下册)-(原书第四版) pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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MR格林 著

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出版社： 科学

ISBN：9787030519979

商品编码：12033936353

出版时间：2017-03-01

基本信息

商品名称： 分子克隆实验指南-(上.中.下册)-(原书第四版)	出版社： 科学出版社	出版时间：2017-03-01
作者：M.R.格林	译者：贺福初	开本： 32开
定价： 598.00	页数：	印次： 1
ISBN号：9787030519979	商品类型：图书	版次： 1

内容提要

　　分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

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　　Originally published i English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Gree and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print iChina.Authorized Simplified Chinese translatio of the English editio? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translatio is published and sold by permissio of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

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分子生物学技术手册：从基础到前沿 内容简介： 本书汇集了现代分子生物学领域中最核心、最前沿的实验技术和研究策略，旨在为生命科学研究人员、高等院校师生及生物技术从业者提供一本全面、深入且操作性强的技术指南。全书结构严谨，内容详实，覆盖了从基础的核酸和蛋白质操作到复杂的基因组编辑和高通量测序等多个层面。 第一部分：分子生物学基础技术与核心操作 本部分奠定了分子生物学实验的基石。首先，详细阐述了各类生物材料的获取与处理，包括细胞的培养、组织匀浆及核酸的提取纯化。在核酸操作方面，对DNA、RNA（包括总RNA、mRNA、非编码RNA）的提取方法进行了详尽的比较和优化指导，强调了不同来源样本对下游应用的影响。 PCR（聚合酶链式反应）技术的原理、优化、常见故障排除及各类衍生技术（如定量实时荧光PCR (qPCR)、反转录PCR (RT-PCR)、长片段PCR、热启动PCR等）被系统地介绍。对于引物和探针的设计，给出了精确的计算模型和注意事项，以确保实验的高效性和特异性。 在分子克隆的经典范式中，本书深入探讨了限制性内切酶的选择与酶切反应的控制，连接反应（包括粘性末端连接和平末端连接）的最佳条件，以及连接效率的评估。载体的选择是克隆成功的关键，书中详细对比了原核表达载体、真核表达载体、酵母载体以及用于特定目的（如腺病毒、慢病毒包装）载体的结构特点、拷贝数调控和筛选标记。 第二部分：基因表达与蛋白质工程 本部分聚焦于基因的功能验证和蛋白质的生产与分析。在基因表达研究方面，重点介绍了瞬时转染、稳定转染的技术流程，包括化学法（磷酸钙法、脂质体法）、物理法（电穿孔法、微注射法）以及病毒载体介导的基因递送策略。针对不同细胞系（如原代细胞、永生化细胞系、干细胞）的转染效率优化方案被详细列出。 蛋白质的表达与纯化是生物制药和基础研究的核心环节。书中详细描述了在大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞系统中表达重组蛋白的策略。尤其对蛋白质的溶解性问题（包涵体的复性）提供了多种化学和物理方法。纯化部分，系统阐述了层析技术（亲和层析、离子交换层析、分子筛层析）的选择与串联使用，并对层析介质的活化、上样和洗脱条件进行了精确指导。 蛋白质的定性与定量分析技术占据了重要篇幅，包括SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）、Western Blotting（免疫印迹）的抗体选择、封闭液优化及显色体系的选择。此外，酶活性的测定、蛋白质修饰（如磷酸化、糖基化）的检测也得到了充分的阐述。 第三部分：基因组编辑与前沿技术 随着基因组学时代的到来，本部分着重介绍了颠覆性的基因编辑技术和高通量测序原理。 CRISPR/Cas9系统作为当前最主流的技术，本书不仅介绍了其基本原理，更详尽地阐述了sgRNA的设计原则、递送方式（质粒、mRNA、RNP）的选择，以及如何评估脱靶效应。书中专门辟章节讨论了新型碱基编辑器（Base Editing）和先导编辑器（Prime Editing）的应用场景和操作难点。 对于基因敲除/敲入的验证，不仅仅局限于传统的测序，还包含了T7内切酶I/核酸酶消化法、高分辨熔解曲线分析（HRM）等快速验证方法。 高通量测序（NGS）方面，本部分涵盖了主流测序平台（Illumina等）的文库构建流程，包括DNA/RNA片段化、接头连接、PCR扩增和质控标准。特别针对ChIP-seq（染色质免疫沉淀测序）、RNA-seq（全长与测序）以及单细胞测序（scRNA-seq）的实验设计、数据预处理和基本分析流程，提供了详尽的实验操作流程图和常见问题解析。 第四部分：分子生物学实验的质量控制与规范 成功的分子生物学实验依赖于严格的质量控制。本部分强调了试剂的制备与储存规范（如酶、抗体、核酸/蛋白的保存条件），强调了无菌操作和污染控制的重要性。此外，书中还提供了大量关于实验数据分析的统计学基础知识，以及如何撰写规范的实验记录和报告，确保实验结果的可重复性和可追溯性。从安全角度，对涉及生物危害性材料（如病毒载体、致病菌株）的操作规范进行了详细说明。 本书内容覆盖面广，技术细节丰富，力求为读者提供一个从理论概念到实际操作的无缝衔接的实验参考平台。

评分☆☆☆☆☆

这套书的价值，远超出了一个普通实验手册的范畴，它更像是一部分子生物学领域的“工具箱”。令我印象深刻的是它对于实验设计的哲学思考。很多初学者只关注“怎么做”，这本书却花了不少篇幅去解释“为什么这么做”，以及在不同实验体系下，哪种策略是最优解。这种对原理的深入挖掘，帮助我从根本上理解了分子克隆背后的逻辑。例如，在选择限制性内切酶时，它不仅列出了切割位点，还深入分析了酶的活性对GC含量、DNA浓度等环境因素的敏感性，并给出了应对策略。中册和下册在高级应用的拓展上也做得非常到位，涉及到一些复杂的基因编辑技术的前期准备工作，这些内容在其他入门级书籍中是很难找到的。可以说，它为我后续深入学习基因编辑和蛋白质表达打下了极其坚实的基础。它要求你精确，但同时也教会你变通，这种平衡掌握得恰到好处。

评分☆☆☆☆☆

这本书简直是为我这种分子生物学初学者量身打造的“救星”！拿到手沉甸甸的三册，那种厚重感就让人觉得内容绝对扎实可靠。我最欣赏的是它的叙事方式，不是那种枯燥的教科书罗列，而是真的像一位经验丰富的导师，手把手地带着你走进每一个实验的细节。刚开始接触PCR和质粒构建的时候，我常常感到无从下手，那些理论公式看得我头大。但是这本书，它会细致到告诉你试剂的品牌选择、微量移液的技巧，甚至连离心机转速和时间的设定都给得非常明确。特别是关于酶切和连接的章节，我之前总是搞不清楚为什么有时候会失败，读了它之后，我才明白其中一个关键点在于缓冲液的配比和温度控制的细微差别。它的图示非常精妙，很多复杂的步骤都有清晰的流程图和配图，让你一眼就能明白“下一步该做什么”。对于需要频繁进行克隆实验的科研人员来说，这套书简直是“开箱即用”的实战宝典，比查阅零散的SOP有效率高太多了。我甚至觉得，光是把里面的操作步骤严格执行一遍，我的实验成功率就有了质的飞跃。

评分☆☆☆☆☆

说实话，我原本以为这种“指南”性质的书籍，内容难免会有些过时，毕竟生物技术更新速度太快了。但这本书的第四版，展现出了令人惊喜的与时俱进。它不仅仅停留在基础的质粒文库构建，对于一些新兴的分子工具和策略也有所涉猎，这让我这个在读研究生感到非常欣慰。尤其是在处理一些疑难杂症时，它提供的“故障排除”部分简直是金玉良言。比如当我遇到DNA电泳条带拖尾或者克隆效率低下时，我不再是茫然地在网上搜索零散的论坛帖子，而是直接翻到对应章节，里面罗列了所有可能的原因，并给出了针对性的解决方案和验证步骤。这种系统性的错误排查能力，是任何网络资源都无法比拟的。它的写作风格非常严谨，用词精确，但又不失亲和力，不像某些专业文献那么晦涩难懂。阅读过程中，我感觉自己不是在“学习”知识，而是在“掌握”一项技能。对于我这种需要独立完成课题的实验狗来说，这套书无疑是大大缩短了我的摸索时间，让我的研究进程能更稳健地向前推进。

评分☆☆☆☆☆

拿到这三册书时，我首先关注的是它的排版和索引系统。对于这种内容极其丰富的工具书，清晰的导航至关重要。这本书在这方面做得堪称业界标杆。页边空白处有明确的小标题提示，章节之间的跳转非常流畅。更棒的是，它有一个非常详尽的术语索引和试剂/仪器索引。我记得有一次我急需查找一种特定缓冲液的配方，但记不清具体是哪个实验环节，我直接通过试剂索引，几秒钟内就定位到了准确的配方和操作步骤。这极大地提高了我的工作效率。此外，它的纸张质量也非常好，便于在潮湿的实验室环境中翻阅和标记，这点小细节足见出版方的用心。这本书的使用体验非常顺畅，它不是那种“读完就束之高阁”的书，而是那种需要随时放在实验台边，频繁翻阅、做笔记的“工作伙伴”。其结构设计完全符合高强度实验工作的实际需求。

评分☆☆☆☆☆

我之前购买过好几本同类别的书籍，但往往要么过于理论化，要么就是操作步骤过于简化，缺乏对“为什么”的解释。这套《分子克隆实验指南》最打动我的是它所体现出的“严谨的包容性”。它既照顾到了第一次接触实验的本科生，通过清晰的步骤指导他们完成基础操作；同时也为资深的研究人员提供了优化和创新实验的理论深度和参考案例。特别是它对负对照和阳性对照的设置给出了详尽的指导和预期结果分析，这对于确保实验结果的可靠性是至关重要的。阅读过程中，我能感受到作者团队在编写过程中的那种高度的责任感，他们似乎预料到了读者在实验中可能遇到的所有陷阱和困惑。读完它，我不仅学会了如何克隆基因，更重要的是，学会了如何像一个专业的分子生物学家那样去思考和设计实验。这套书不仅是工具，更是一种思维方式的培养。